豬布氏桿菌PCR檢測試劑盒?使用方法

豬布氏桿菌PCR檢測試劑盒使用方法:

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。

二、制備 Cps 標準曲線(xiàn)（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對照。

1. 標記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

3. 產(chǎn)品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。

4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。

5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。

6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對照。

8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線(xiàn)。