對PCR擴增試劑盒的一般建議及事項說(shuō)明

　　一般建議：

　　PCR擴增試劑盒可很穩定的擴增出終長(cháng)度小于12 kb的片段（如基因組DNA）；當擴增片段終長(cháng)度在12-20 kb時(shí)（如基因組DNA），那么模板質(zhì)量，變性條件和恰當的dNTP/Mg離子濃度等相關(guān)條件對于實(shí)驗結果非常關(guān)鍵；如果擴增片段總長(cháng)度大于20kb，則操作條件需要進(jìn)一步優(yōu)化。

　　PCR擴增試劑盒相關(guān)注意事項說(shuō)明：

　　1.對于長(cháng)片段擴增，請使用薄壁PCR管。

　　2.變性時(shí)，盡可能縮短變性時(shí)間，降低變性溫度。

　　3.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。

　　4.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。

　　5.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。

　　6.PCR試劑配制應使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。

　　7.試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。

　　8.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。

　　9.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。