疏螺旋體PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
小鼠凝血因子XIII B（F13B）elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 表觀(guān)遺傳學(xué) G蛋白信號  

小鼠凝血酶抗凝血酶復合物（TAT）elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 生長(cháng)因子和激素 糖尿病  

小鼠內皮型一氧化氮合成酶3（eS-3）elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細胞類(lèi)型標志物  

小鼠苗條素受體（LR/Ob-R）elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)  

小鼠輪狀病毒（RV）抗原（Ag）elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(cháng)因子和激素 轉運蛋白  

小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ（MIP-1δ/CCL15）elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 細胞類(lèi)型標志物  

小鼠膠原吡啶交聯(lián)（PYD）elisa試劑盒Anti-IL5RA Antibody研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 干細胞 轉錄調節因子 鋅指蛋白 表觀(guān)遺傳學(xué)  

小鼠活化素A（ACV-A）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 激酶和磷酸酶  

小鼠骨特性堿性磷酸酶（BALP）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 糖尿病  

小鼠長(cháng)停滯特異性基因產(chǎn)物6（gas-6）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 新陳代謝  

小鼠白血病抑制因子受體（LIFR）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 細胞凋亡 細胞粘附分子 細胞表面分子  

小鼠白介素9（IL-9）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)  

小鼠胺氧化酶（含黃素）A（MAOA）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)  

小鼠γ干擾素受體（IFN-γR）elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody產(chǎn)品類(lèi)型  一抗  內參抗體   

小鼠αL艾杜糖苷酸酶（IDUA）elisa試劑盒Anti-IL6R Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)  

1,2-二錄乙烷¤1,2-DichloroethaneAR500ml

M5885-100gL-Proline L-脯安酸147-85-3100g42

81325-5GPolygalacturonic acid 多聚半乳糖酸鈉25990-10-75g

Hematoxylin and Eosin Staining Kit

次甲基藍 (亞甲基藍)25g

十二醇DodecalGCS2ml

ER1652TauI250 units2

G6251-25Gβ-Glycerophosphate diwo7ium β-甘油磷酸鈉819-83-025g

肌酸酐5g

肖鐿5g

大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 ，英文名： XOD ELISA Kit

Rabbit oponin I (Tn- I) ELISA Kit 兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒

腦膜炎奈瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforMouselymphocytefactorELISAKit小鼠淋巴細胞因子規格：48T/96T

體液過(guò)氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

ELISAKit2,3-DPG人2,3-二磷酸甘油酸規格：48T/96T
疏螺旋體PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)人肝癌細胞，Bel-7405細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶

人肝癌細胞，Hep G2細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶

人肝癌細胞，huh-7.5.1細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶

人肝癌細胞，huh-7.5細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶

人肝癌細胞，huh-7細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶

人肝癌細胞，MHCC-97L細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。