牛腸道病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
豬β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白（β-TG）elisa試劑盒Anti-KLF4 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白

小鼠微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B（MAP1LC3B）elisa試劑盒Anti-KLF8 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 通道蛋白 轉運蛋白

小鼠腎上腺髓質(zhì)素（ADM）elisa試劑盒Anti-KLF5 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 新陳代謝

小鼠熱休克蛋白20（Hsp-20）elisa試劑盒Anti-KLF6 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 通道蛋白 細胞膜受體 新陳代謝

小鼠凝血因子Ⅹ（FⅩ）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細胞生物 信號轉導 轉錄調節因子 通道蛋白 細胞膜受體

小鼠磷酸肌醇3激酶（PI3K）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白 細胞膜受體

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基（sRANKL）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 藥物及化合物

小鼠抗心磷脂抗體IgA（ACA-IgA）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子

小鼠甲基化酶（Methylase）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶

小鼠黃體生成素（LH）elisa試劑盒Anti-KLK10 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 信號轉導

小鼠過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物酶（LPO）elisa試劑盒Anti-KLK1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶

小鼠高爾基蛋白73（GP-73）elisa試劑盒Anti-KLK2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 細胞周期蛋白

小鼠分泌型磷脂酶A2（sPLA2）elisa試劑盒Anti-KLK3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 激酶和磷酸酶

小鼠肥大細胞類(lèi)胰蛋白酶（MCT）elisa試劑盒Anti-KLK2 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 微生物學(xué) b-淋巴細胞

小鼠超敏C反應蛋白（hs-CRP）elisa試劑盒Anti-KLK11 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶

鎘CadmiumAR250g

SM1233FastRuler Ultra Low Range DNA Ladder, ready-to-use175

C7170-10GChitin 幾丁質(zhì)(甲殼素)1398-61-410g

膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒50T

Mineral Oil, Light White500ml

乙酸正丁酯N-butyl acetateGCS2ml

SM0371GeneRuler 50bp DNA Ladder157

N4126-25GVitamin B3 (Nicotinic acid) 維生素B3 (煙酸)(尼古訂酸 )59-67-625g

CTP100mg

α-Chymotrypsin1g

大鼠一氧化氮()ELISA試劑盒 ，英文名：  ELISA Kit

人抗神經(jīng)節苷脂抗體(GM1)ELISA檢測試劑盒Humanai-gangliosideaibody,GM1ELISAKit 96T/48T

大鼠VGF神經(jīng)生長(cháng)因子誘導蛋白(VGF)免疫試劑盒 Rat VGF Nerve Growth Factor Inducible,VGF ELISA Kit

CLIAKitforSSELISAKit大鼠生長(cháng)抑素規格：48T/96T

人血液免疫球蛋白M(IgM)免疫比濁法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitBP180-Ab人抗BP180抗體規格：48T/96T
牛腸道病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)CD339抗體Eucalyptone中文名：別名：Macrocarpal am1分子式：C28H38O7

γ連環(huán)蛋白/Catenin γ ， γ鏈接素抗體Macrocarpal C中文名：大果桉醛C別名：Macrocarpal G分子式：C28H38O5

磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體Macrocarpal B中文名：大果桉醛B別名：分子式：C28H40O6

氨基末端激酶1/2/3抗體11(13)-Dehydroivaxillin中文名：別名：分子式：C15H20O4

胞質(zhì)接頭蛋白Keap1Dehydrocostus lactone中文名：去氫木香內酯別名：分子式：C15H18O2
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。