前病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
植物吲哚乙酸（IAA）elisa試劑盒Anti-POLR3H Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

羊通道蛋白5（AQP5）elisa試劑盒Anti-POLR3H Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

鯊魚(yú)三碘甲狀腺原氨酸（T3）elisa試劑盒Anti-POM121 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導  

鯊魚(yú)甲狀腺素（T4）elisa試劑盒Anti-POTEA Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子  

人食管癌組織源細胞說(shuō)明書(shū)Anti-POTEB Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導  

大鼠尿道上皮細胞說(shuō)明書(shū)Anti-POTEG Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導  

T24（人膀胱移行細胞癌細胞）報價(jià)Anti-POU2F1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導  

EB-3（人Burkitt淋巴瘤細胞）說(shuō)明書(shū)Anti-POTEH Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 轉錄調節因子  

FC33（人胚胎腎細胞（Asp-2基因修飾））報價(jià)Anti-PPARD Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉導 生長(cháng)因子和激素 細胞膜受體  

NCI-H209（人小細胞肺癌細胞）報價(jià)Anti-PPARA Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子 細胞膜受體  

人支氣管成纖維細胞*培養基價(jià)格Anti-PPFIBP1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子 淋巴細胞 t-淋巴細胞  

大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節細胞*培養基報價(jià)Anti-PPHLN1 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 信號轉導 干細胞 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶 表觀(guān)遺傳學(xué)  

小鼠肝動(dòng)脈內皮細胞*培養基價(jià)格Anti-PPHLN1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白 細胞膜受體  

甲基麥冬黃酮A74805-90-6價(jià)格Anti-PPIF Antibody研究領(lǐng)域  

β-谷甾醇83-46-5實(shí)驗方法Anti-PPM1K Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 干細胞 轉錄調節因子 淋巴細胞 t-淋巴細胞  

三糖鐵瓊脂斜面限供汽運Anti-HCV-NS3  哈巴苷

氧化酶試紙Anti-HCV-NS4a  黃柏堿

氧化酶試劑Anti-HDL-R 黃柏酮

賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯LDCAnti-Heamachrome  茴香腦

鳥(niǎo)氨酸脫羧酶肉湯ODCAnti-HEV  黃楊堿

精氨酸雙解酶肉湯ADHAnti-HGF  

培養基Anti-HGV  標準品

氨基酸試驗對照Anti-HHV4/EBV  亥茅酚苷

無(wú)菌液體石蠟Anti-HHV8/ORF K2/vIL-6  4-磺酰胺基苯肼鹽

溶液Anti-HIF-1α   漢黃芩素
前病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)Cobalt iron oxide通用試劑　25G

Cobalt(II) hydroxide通用試劑　25G

Cobalt(II) chloride ,≥99.7%通用試劑　25G

Cobalt(II) sulfate hydrate通用試劑　5G

Cobalt (Ⅲ) acetylacetonate通用試劑　25G

Cobalt(II) acetylacetonate ,≥97.0%通用試劑　100G

Cobalt chloride hexahydrate通用試劑　50G

Cobalt(II) acetate tetrahydrate通用試劑　10G

Cobalt sulfate heptahydrate通用試劑　25G

Cobalt nitrate hexahydrate通用試劑　25G

Cobaltous naphthenate通用試劑　250G

Cobalt(II)oxide通用試劑　25G

Cobalt(II) oxalate dihydrate通用試劑　100G

Cobalt carbonate通用試劑　250G

Nickel acetylacetonate hydrate通用試劑　5G
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。