鳩寧病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
正磷酸〖鐵〗四物使用說(shuō)明書(shū)Anti-SLC5A3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 激酶和磷酸酶

D-葡萄糖醛酸保存Anti-SLC6A15 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué)

28-表高油菜素內酯實(shí)驗步驟Anti-SLC6A6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 腫瘤細胞生物標志物

3-吲哚丁酸保存Anti-SLC5A6 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

5-肌苷二磷酸三鈉鹽使用說(shuō)明書(shū)Anti-SLC6A16 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉導 細胞周期蛋白 表觀(guān)遺傳學(xué)

2′-氟脫氧胞苷價(jià)格Anti-SLC6A17 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 信號轉導 生長(cháng)因子和激素 細胞周期蛋白 轉錄調節因子 細胞分化 細胞外基質(zhì)

柱式醬油 DNAout10 次多少錢(qián)Anti-SLC8A1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 信號轉導 細胞骨架 細胞外基質(zhì)

柱式真菌 DNAout50 次哪里有賣(mài)Anti-SLC9A6 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 免疫學(xué) 信號轉導 干細胞 生長(cháng)因子和激素 細胞周期蛋白 轉錄調節因子 內皮細胞

DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL哪里有賣(mài)Anti-SLC9A7 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 細胞周期蛋白 轉錄調節因子 細菌及病毒 細胞分化

溴化乙錠溶液 ,10 mg/mL1.5mL哪里有賣(mài)Anti-SLC9A3R2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

微量核酸沉淀劑10mL哪里有賣(mài)Anti-SLC9A8 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 細胞周期蛋白 激酶和磷酸酶

柱式 DNA PAGE 膠回收試劑盒50 次哪里有賣(mài)Anti-SLCO1B1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 淋巴細胞 b-淋巴細胞

超快非醇核酸沉淀劑100 次多少錢(qián)Anti-SLCO1A2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

超級雜交液 B（含甲酰胺）100mL哪里有賣(mài)Anti-SLIT3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué)

酵母 tRNA 溶液 B（ 精提 ）1.5mL多少錢(qián)Anti-SLIT2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué)

細菌學(xué)蛋白胨Anti-SHP2/PTPN11尿嘧啶

四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液基礎Anti-SIP1   歐前胡素

溶液Anti-Skp2   歐當歸內酯A

0.1%煌綠溶液Anti-Slc22A17   歐夾竹桃苷

無(wú)菌四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液Anti-SLC24A5   派立辛

EF-18 瓊脂基礎Anti-SLC6A19   蒲公英甾

培養基anti-Smac/DIABLO  標準品

新生霉素溶液SLC34A2/NaPi-2b  蟛蜞菊內酯

無(wú)菌采樣袋/均質(zhì)袋Anti-Smad2/3  菝葜皂苷元

1%堿性蛋白胨（APW）Anti-Smad4  輔酶Q10
鳩寧病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)去整合素樣金屬蛋白酶11抗體Piplartine中文名：別名：分子式：C17H195

Pellitorine中文名：墻草堿別名：分子式：C14H25

去整合素樣金屬蛋白酶12抗體2-(4-Hydroxy-2-oxoindolin-3-yl)acetonitrile中文名：別名：分子式：C10H8N2O2

去整合素樣金屬蛋白酶15抗體1-Methoxyindole-3-carboxylic acid中文名：別名：分子式：C10H93

去整合素樣金屬蛋白酶2抗體Reserpine中文名：別名：分子式：C33H40N2O9
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。