溶血性曼氏桿菌PCR檢測試劑盒規格

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
類(lèi)人猿降鈣素（CT）elisa試劑盒Anti-ETFB 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

大鼠肺成纖維細胞（Rat Lung Fibroblasts Cells）Anti-EFHC1 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

U-2 OS（人骨肉瘤細胞）現貨供應Anti-EFHC2 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

HCC 94（人鱗癌細胞（高分化））說(shuō)明書(shū)Anti-EFHD1 研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 干細胞 轉錄調節因子 表觀(guān)遺傳學(xué)

大鼠肺血管平滑肌細胞*培養基現貨供應Anti-EF-CBP2 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

MEM（不含L-谷氨酰胺、非必需氨基酸，含雙抗）價(jià)格Anti-EGFR5/CLEC14A 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

隱丹參酮35825-57-1價(jià)格Anti-phospho-MEK1/MAP2K1(Ser385)  研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

羅漢果皂苷ⅢA1 88901-42-2 ?*Anti-EID1 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

人血清白蛋白（組份五）價(jià)格Anti-ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

鏈親和素實(shí)驗步驟Anti-ERRB2/Estrogen Related Receptor beta 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

硫酸魚(yú)精蛋白價(jià)格Anti-ERG25 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

DIPSO單鈉鹽價(jià)格Anti-EMP2 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

5-氟尿嘧啶價(jià)格Anti-Alpha-ENaC 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

噻苯隆保存Anti-ENTPD5/CD39L4 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

溴麝香草酚藍實(shí)驗步驟Anti-EST1A 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

β-細辛腦14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原） EB病毒核抗原-3IgG

豨薟精14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris))  植物14-3-3蛋白抗原 E-鈣粘附分子IgG

香葉FRA1/FOSL1 peptide   FRA-1多肽蛋白 內皮素轉化酶1IgG

細辛AIF　(Apoptosis-Inducing Factor)  調亡誘導因子(多肽片斷抗原） 抗內皮素轉化酶2IgG

鹽酸小檗胺Adenylate Kinase 1 (AK-1)  腺苷酸激酶-1 食道癌相關(guān)基因IgG

隱丹參酮Akt/PKB  蛋白激酶B（抗原） 細胞外基質(zhì)蛋白1IgG

標準品2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophexyacetic acid)  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍蛋白抗體

遠志酸2,4-D/BSA  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白 抗嗜酸性粒細胞陽(yáng)離子蛋白IgG

羊藿苷CA153/MUC1/KL-6 peptide  乳腺癌相關(guān)抗原 外胚層發(fā)育不良IgG

延胡索乙素ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag)  間變型淋巴瘤激酶（抗原） 溶血磷脂酸受體蛋白2IgG
溶血性曼氏桿菌PCR檢測試劑盒規格大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光1克

大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50張/盒
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。