蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
15mL DNA 離心超濾管 （90-150 KD）1個(gè)說(shuō)明書(shū)Anti-EPOR 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

MnCl2溶液，25mM，PCR 級5mL品牌Anti-EphA4 R/Eph receptor A4 研究領(lǐng)域  細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

石蠟油，PCR 級10mL多少錢(qián)Anti-EIF2AK2/PKR 研究領(lǐng)域  細胞生物 轉錄調節因子 轉運蛋白

dTTP 溶液，100mM0.5mL哪里有賣(mài)Anti-phospho-eIF4E(Ser209) 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 表觀(guān)遺傳學(xué)

G（5´）ppp（5´）G 帽結構類(lèi)似物25 OD說(shuō)明書(shū)Anti-EPHB4 研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué)

單細胞懸浮液1mL說(shuō)明書(shū)Anti-ERK1/2(p44/42 MAPK) 研究領(lǐng)域  心血管 信號轉導

真菌種屬鑒定 PCR Mix 5100 次說(shuō)明書(shū)Anti-Enkephalin/P-ENK 研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 信號轉導

φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書(shū)Anti-ERK4 研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué)

菌落 PCR 試劑盒 2.050 次說(shuō)明書(shū)Anti-ET-3/Endothelin 3 研究領(lǐng)域  心血管 信號轉導 生長(cháng)因子和激素 激酶和磷酸酶 泛素

素鈉溶液 ,50mg/mL1mL多少錢(qián)Anti-ETS2 研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 信號轉導

惡性瘧PCR檢測試劑盒保存Anti-ENaCg/γENaC 研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導

玉米MON810/MSPCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)Anti-ERAS/HRAS2 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

轉基因植物PAT基因PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)Anti-ETV7 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué)

人活化蛋白CElisa Kit說(shuō)明書(shū)Anti-EEF2 研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學(xué) 細胞凋亡 細胞周期蛋白

小鼠乙酰膽堿轉移酶Elisa Kit說(shuō)明書(shū)Anti-EEF2k 研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 細胞周期蛋白

銀鍛苷Immuglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1  免疫球蛋白結合蛋白-1 雌激素受體IgG

3－乙?；橄闼酑D133  造血干細胞抗原CD133 雌激素受體αIgG

3－乙?；?1－酮CD133  造血干細胞抗原（多肽抗原） 抗人磷酸化雌激素受體αIgG

芫花素H5N1-H5  禽流感H5亞型全病毒 雌激素受體α/βIgG

野鷲尾苷Newcastle disease virus  雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒） 細胞核受體Rev-ErbαIgG

異甜菊SDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子1 磷酸化細胞核受體Rev-ErbαIgG

標準品Bacillus anthraci  炭疽桿菌菌體蛋白抗體

原阿片堿ADCY1 peptide  腺苷酸環(huán)化酶1多肽抗原 雌激素受體βIgG

異蓮心堿c-erbB-2蛋白  c-erbB-2蛋白（抗原） 雌激素受體β IgG

α-亞油酸ChAT(Choline Acetyltransferase)  膽堿乙酰轉移酶（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化雌激素受體αIgG
蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

大鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升

大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

大鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠固(ALD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。