黏孢子蟲(chóng)屬通用PCR檢測試劑盒規格

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
L-Ornithine HCL人上皮細胞*培養基大黃酚 分析標準品，≥98%

D-Ornithine HCL人成纖維細胞*培養基雙醋瑞因 ≥95%（HPLC)

DL-Ornithine HCL人前列腺上皮細胞*培養基黃豆苷原 98%

L-Ornithine Ethylester Dihydrochloride人胰島β細胞*培養基大黃素 分析標準品，≥96.0% (HPLC)

L-Aspartic acid人前列腺平滑肌細胞*培養基漆黃素 98%

L-Aspartic acid sodium sal人前列腺成纖維細胞*培養基甲溶液 ACS,37 wt. % in H2O, 含10-15% 甲穩定劑

Potassium L-Aspartate人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養基京尼平甙  分析標準品，≥98%

L-Aspartic acid Mg salt人胰腺星狀細胞*培養基乙二溶液  40 wt. % in H2O (8.8 M)

D-Aspartic acid人胰腺上皮細胞*培養基甘草酸  93%

DL-Aspartic acid人淋巴內皮細胞*培養基加蘭他敏 98%

L-Asparagine人淋巴成纖維細胞*培養基二氫黃酮甙 97%

L-Asparagine Mohydrate人淋巴血管內皮細胞*培養基和厚樸酚 分析標準品

DL- Asparaning H2O人臍帶單核細胞*培養基和厚樸酚 ≥98% (HPLC)

L-Cysteine人外周血白細胞*培養基酚 97%

DL-Cysteine人呼吸道上皮細胞*培養基番茄紅素 分析標準品，≥95%

L-Cysteine.HCI.H2O人上皮細胞*培養基柚皮苷 95%

鹽酸平陽(yáng)霉素p70 S6 Kinase/P70 Beta1  p70S6Kb抗原Thrombospondin 2  血小板反應蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗體

硫酸博萊霉素/博來(lái)霉素/爭光霉素PALB2(partner and locaizer of BRCA2)  乳腺癌易感基因相關(guān)蛋白2Thrombomodulin/CD141  血栓調節蛋白抗體

替佐米/保特佐米PAFR/PTAFR  血小板活化因子受體抗原thrombin II  凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗體

替佐米(標準品)Phospho-PAK4 (Ser99) peptide  磷酸化p21激活激酶4多肽抗原Thrap3/TRAP150  甲狀腺激素受體相關(guān)蛋白3抗體

博舒替尼PAK7/PAK5/MBT  激活激酶PAK7/PAK5抗原THRA1+2  甲狀腺激素受體α1+α2抗體

布地奈德PAR-1 (Protease-activated receptors-1)  蛋白酶激活受體-1抗原THRA1  甲狀腺激素受體α1抗體

布地奈德（標準品）PAR-2 (Protease-activated receptors-2)  蛋白酶激活受體-2抗原THOC2  轉錄因子THOC2抗體

亞葉酸鈣PAR4 (protease-activated receptor 4)  蛋白酶活化受體4/前列腺細胞凋亡反應蛋白4抗原Thioster-containing protein 1  按蚊硫酯包含蛋白-1抗體

亞葉酸鈣（標準品）PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus  多腺苷二磷酸多聚酶抗原(N端)Thioredoxin 2  線(xiàn)粒體硫氧還蛋白2抗體

喜樹(shù)堿PAX8(Paired box gene 8)  配對盒基因8抗原Thioredoxin  硫氧還蛋白抗體
黏孢子蟲(chóng)屬通用PCR檢測試劑盒規格人白細胞調節素(LR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25000u

人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

人半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：20個(gè)/包

人半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克