綿羊皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒規格

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
5′-CDP，2Na三(基)伍甲基環(huán)戊二烯基釕(II)六氟磷酸 96%α-己基肉桂 ≥95%,Kosher

5′-CTP，2Na聚乙烯 18-88 Mw ~130,000柳酸己酯 98%

5′-CTP，3Na聚乙烯 20-98 Mw ~125,000酸異戊酯 98%

5′-CTP，4Na聚乙烯 4-98 Mw ~27,000酸異戊酯 ≥98%, FCC

Thymine五氯 99%,用于植物細胞培養己酸異戊酯  98%

Uracil五氯標準溶液 0.1mg/ml2-異基-4-甲基噻唑 98%

Uridine五氯 分析標準品，99%異戊 98%

U 5′-P五氯標準溶液 100μg/ml,u=2%吲哚 99%

5′-UMP，2Na五氯標準溶液 10μg/ml,u=2%吲哚 ≥99%, FCC, Kosher

5′-UDP五氯 97%異丁酯 99%

5′-UDP,2Na硫酸奎尼丁 USP級異丁香酚(正+反) 97%

5′-UTP,3Na2-喹喔啉羧酸 97%乙?；惗∠惴?≥98%, FCC

5′-UTP,4Na羅丹明B 高純級，≥95.0%（HPLC）乙酸異龍腦酯 90%

UDPGA樹(shù)脂天青 90%乙位紫羅蘭酮 97%

UDPG羅丹明6G AR異甲基紫羅蘭酮70 60-70%

Guasine樹(shù)脂天青 for cell culture,≥90% (HPLC)甲酸異戊酯  93%

鹽酸恩諾沙星（標準品）PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody DuetSATB1  核基質(zhì)結合區結合蛋白1抗體

佐米曲普坦WIP1 (D4F7) Rabbit mAbSASS6  紡錘體組裝異常蛋白6抗體

胸腺肽alpha 1IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAbSASH1  腫瘤抑制基因PEPE1抗體

替加氟IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAbSART3  T淋巴細胞識別的鱗狀細胞癌SART3抗體

替加氟（標準品）SignalSilence® MDR1/ABCB1 siRNA IISART1  T淋巴細胞識別的鱗狀細胞癌抗原抗體

阿昔莫司，阿西莫司PAI-1 (D9C4) Rabbit mAbSARS S-protein  抗表面S蛋白抗體

阿昔莫司，阿西莫司（標準品）MDH2 (D8Q5S) Rabbit mAbSARS putative orflab polyprotein  抗體

阿達帕林Phospho-cdc25C (Ser216) Blocking PeptideSARM1  SARM1蛋白抗體

阿達帕林(標準品)EWS AntibodySarcomeric Alpha Actinin/ACTN2  α橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白/α-SCA抗體

阿德福韋NFI-C AntibodySAPK3/MAPK12  應激活化蛋白激酶3抗體（絲裂原活化蛋白激酶12）
綿羊皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒規格人巨噬細胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人聚集蛋白(Agrin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人卷曲蛋白8(FZD8)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫克

人軍團菌抗體IgA(LPAb-IgA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人軍團菌抗體IgG(LPAb-IgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人軍團菌抗體IgM(LPAb-IgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25片

人軍團菌抗原(LPAg)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：150米

人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克