雷氏普羅威登斯菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Aluminium-nickelL-高絲氨酸 98%4，4'-二（9-咔唑）聯(lián)苯 98%

Devarda's alloyD-組氨酸 99%2,5-二(氯甲基)- 1-甲氧基-4- (2-乙基已氧基)-苯 98%

Wood’s metalL-高苯氨酸 98%2-溴-9-芴酮 96%

 Gold tribromideDL-組氨酸鹽酸鹽 BR9,9-二辛基-2,7-二溴基芴 97%

Gold oxideDL-高苯氨酸 98%9,9-二己基-2,7-二溴芴 97%

PPODL-異亮氨酸 98%3-癸基噻吩 98%

POPOPD-異亮氨酸 98%9，9-二甲基-2，7-二溴芴 98%

ImidazoleD-別異亮氨酸 98%2,7-二溴芴 98%

1-MethylimidazoleDL-亮氨酸 98%2,6-二甲基-γ-吡喃酮 99%

Levamisole hydrochlorideL-叔亮氨酸 99%2,7-二溴芴酮 96%

AECDL-賴(lài)氨酸 99%2,6-二甲基-4H-4-亞吡喃基二 98%

2-AmibenzimidazoleD-亮氨酸 99%3-己基噻吩 98%

2-AmibenzothiazoleD-蛋氨酸 99%2-甲氧基-5-(2′-乙基已氧基)對苯二甲 98%

2-AmithiazoleL-正纈氨酸 99%N,N′-二苯基-N,N′-(1-萘基)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二胺（NPD） 99.

BenzimidazoleL-正亮氨酸 99%3-辛基噻吩 98%

Butyl-PBDD-鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽 99%6,13-五并苯醌 99%

奧美沙坦酯 Lmx1B (D1E2) Rabbit mAbRabbit anti-Bovine IgM whole serum  兔抗牛IgM抗血清

四氫生物蝶呤；沙蝶呤;(6R)-BH4CHD1L (E1I8C) Rabbit mAbRabbit Anti-Bovine IgM  兔抗牛IgM

安倍生坦Phospho-Akt1 (Ser129) (D4P7F) Rabbit mAbRabbit anti-Bovine IgG whole serum  兔抗牛IgG抗血清

安倍生坦(標準品)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb  (Alexa Fluor® 555 Conjugate)Rabbit Anti-Bov IgG/RBITC  羅丹明標記的兔抗牛IgG

鹽酸決奈達隆XPF (D3G8C) Rabbit mAbRabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗牛IgG

決奈達隆(標準品)Sec31A (D1G7I) Rabbit mAbRabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的兔抗牛IgG

雷諾Atg13 (E1Y9V) Rabbit mAbRabbit Anti-Bov IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的兔抗牛IgG

雷諾(標準品)Atg13 (E1Y9V) Rabbit mAbRabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的兔抗牛IgG

樂(lè )卡地平鹽酸鹽NCAPD3 (D3H6L) Rabbit mAbRabbit Anti-Bov IgG/PE  PE標記的兔抗牛IgG

樂(lè )卡地平鹽酸鹽(標準品)PTMScan® Asymmetric Di-Methyl Arginine Motif [adme-R] KitRabbit Anti-Bov IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標記的兔抗牛IgG
雷氏普羅威登斯菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

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人血管內皮細胞生長(cháng)因子(VEGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

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人血管內皮細胞生長(cháng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤