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兔粘液瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

兔粘液瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
NP檢測試劑盒7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用,嚴禁在不同的液體之間混用!否則將影響試驗結果。

更新時(shí)間:2021-03-13
訪(fǎng)問(wèn)次數:359

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

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 產(chǎn)品名稱(chēng)

 兔粘液瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

 英文名稱(chēng)

 Rabbit Myxomatosis Virus(RMV)PCR

 貨號

 LZP7207

實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
 Silicic acid乙基三苯基化膦 95%DL-α-酚 分析標準品

Silicotungstic acid hydrate甲基三苯基溴化鏻 98%*基氫醌 98%

Tungstic acid四甲基化銨 98%D-α-酚醋酸酯 96%

2-Butynedioic acid四甲基氫氧化銨 AR,25%溶液L-賴(lài)氨酸甲酯鹽酸鹽 98%

α-Bromoisobutyric acid四丁基氯化銨 離子色譜級, ≥99.0%苯甲 AR,99%

Chrysophanic acid四丁基氯化銨 97%草酸二甲酯 CP,98%

Cinnamic acid四乙基氫氧化銨 AR,25%溶液馬來(lái)酸二乙酯 96%

Citrazinic acid四乙基氫氧化銨 AR,25%甲溶液1,4-二甲氧基苯 99%

Tricyanic acid三鹽酸鹽 98%1,4-二甲氧基苯 ≥99%,FCC

1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid四丁基氫氧化銨溶液 ~25% in H2O (~0.8 M)間苯二甲 98%

trans-Ferulic acid四丁基氫氧化銨溶液 10% in H2O馬來(lái)酸二甲酯 98%

Ferulic acid四丁基氫氧化銨溶液 ~25% in methal (~0.8 M)乙酯 AR,99%

Heptadecaic acid四丁基硫酸氫銨 98%苯乙 CP

Heptaic acid四丁基硫酸氫銨 離子對色譜苯乙 GR,99%

Trans-2-Hexeic acid四丁基溴化磷 98%甲氧基乙酸甲酯 99%

Itaconic acid三乙胺鹽酸鹽 for HPLC, ≥99.0%1-萘甲  98%

紐莫康定B0(肺囊康定) Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)PTP1B  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B

福莫特羅 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PTP/PTPase/CD148  蛋白酪氨酸磷酸酶CD148抗體

溴甲后馬托品p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)PTOV1  前列腺腫瘤高表達蛋白1抗體

乙酸阿比特龍酯CD13/APN (E1Y7U) Rabbit mAbPTOP  腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常同源蛋白抗體

溴莫尼定 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjugate)PTN/Pleiotrophin  多效生長(cháng)因子抗體

磺草靈PSMB8/LMP7 (1A5) Mouse mAbPTK9/TWF1  蛋白酪氨酸激酶9抗體

磺草靈(標準品)β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)PTHrP/PTHLH  甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白抗體

苯磺酸貝托司汀MOB1 (E1N9D) Rabbit mAbPTGEs  前列腺素E合成酶抗體

葉綠素銅鈉鹽GABARAP (E1J4E) Rabbit mAbPTGER1  前列腺素EP1受體抗體

新綠原酸(標準品)Phospho-Progesterone Receptor (Ser294) AntibodyPTEN/MMAC1(NT)  一種腫瘤抑制基因抗體(N端)
兔粘液瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)人胰島素樣生長(cháng)因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1公斤

人胰島素樣生長(cháng)因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

人胰島素原(PI)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT500克

人胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:10只/袋

人胰淀粉酶(PAMY)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

人胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

人胰多肽(PP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1公斤

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