溶血葡萄球菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
1-O-Acetyl-6beta-O-Isobutyrylbritannilactone2-(四唑-5-基)苯酸 95%紫丁香苷 分析標準品，≥98%

1-O-Acetyl britannilactone硫普羅寧 98%獐牙菜苷 分析標準品，≥98％

2,3-Dihydroxypterodontic acid5-巰基-1-甲基四唑 98%芝麻林素 分析標準品，≥98%

2-Desoxy-4-epi-pulchellin四氮唑 98%芥子堿  分析標準品，≥98%

2-Hydroxyeupatolide2-氯-5-(三氟甲基)苯酸 96%4-異酸酯 98%

2-O-Acetyltutin4-羥基苯酸 97%環(huán)己基異酸酯  98%

3,4-Dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphtho[1,2-b]pyran吡啶-3-酸 97%3,4-二氯苯異酸酯 97%

3,6-Caryolanediol吡啶-4-酸 94%3,5-二氯苯異酸酯 97%

3,11,12-Trihydroxyspirovetiv-1(10)-en-2-one(三氟甲基)*基硅烷 96%對異基苯基異酸酯 98%

3-Acetoxy-4,7(11)-cadinadien-8-one2-氯酸 97%間甲苯異酸酯 99%

3-Acetoxy-4-cadinen-8-one2-氯酸乙酯 97%異酸苯酯 99%（）

3-Hydroxy-4,15-dir-1(5)-xanthen-12,8-olide間苯二甲酰氯 99%三氟甲氧基苯基異酸酯 98%

3-Hydroxycatalpol2-氯酸甲酯 98%異尿酸三縮甘油酯 98%

3-O-Methyltagitinin F3-氯酸 98%對甲苯異酸酯 98%

3-O-Methyltirotundin三氯乙 98%環(huán)己烷羧酸 99%

4,5-Dihydroblumel A熔點(diǎn)管環(huán)己烷羧酸 ≥98%, Kosher

L-乳酸乙酯(>99%,GC)PU.1 AntibodyPhospho-FLT3 (Tyr842)  磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3

溴乙烷(>98%,BR)RPA70/RPA1 AntibodyPhospho-FLT3 (Tyr589/591)  磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3

月桂酸乙酯(>98%,BR)MMP-9 (G657) Antibodyphospho-Filamin A/FLNA (Tyr1046)  磷酸化細絲蛋白A抗體

乙基曙紅(>95%,BS)Myc-Tag Antibodyphospho-Filamin A/FLNA (Ser2522)  磷酸化細絲蛋白A抗體

沒(méi)食子酸乙酯MELK Antibodyphospho-Filamin A/FLNA (Ser2151)  磷酸化細絲蛋白A抗體

煙酸乙酯(>98%,BR)Myc-Tag (9B11) Mouse mAbPhospho-FHIT (Tyr114)  磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體

二茂鐵Myc-Tag (71D10) Rabbit mAbPhospho-FGFR1+FGFR2 (Tyr463)   磷酸化堿性成纖維細胞生長(cháng)因子受體1抗體

反苯環(huán)胺鹽酸鹽；單胺氧化酶(MAO)抑制劑Myc-Tag (71D10) Rabbit mAbPhospho-FGFR1(Tyr653/654)  磷酸化堿性成纖維細胞生長(cháng)因子受體1抗體

黃胺酸(>96.5%，BS)Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Phospho-FGFR1 (Tyr766)  磷酸化堿性成纖維細胞生長(cháng)因子受體1抗體

40%氟酸溶液(39.0~41.0%,BC)Raptor (24C12) Rabbit mAbPhospho-FGFR1 (Tyr307)  磷酸化堿性成纖維細胞生長(cháng)因子受體1抗體
溶血葡萄球菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

小鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

小鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

小鼠幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

小鼠游離(F-TESTO)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

小鼠游離*狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升

小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米