布氏岡比亞錐蟲(chóng)廠(chǎng)家

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
UDPGA1-甲基引唑-3-羧酸 99%烯酸羥酯 97%

UDPG二乙二丁  99%甲基烯酸己酯 98%

Guasine二乙胺 CP，98%二甲基烯酸1,6-己二酯 95%

5′-GMP，2Na二乙胺 AR，99%二烯酸1,6-己二酯 90%

5'-GDP，2Na乙胺 AR,99%甲基烯酸羥乙酯 98%

5'-GTP，2Na環(huán)氧氯烷 ≥99.5% (GC)甲基烯酸羥乙酯 96%

5'-GTP，3Na三乙胺 Standard for GC, ≥99.5% (GC)烯酸羥乙酯 97%(含200-300ppmMEHQ穩定劑)

cyclic GMP三乙胺 AR,78%甲基烯酸羥酯  97%

Isine三乙胺 CP,75%甲基烯酸異癸酯 98%,含150ppm MEHQ穩定劑

5′-IMP，2Na三乙胺 for HPLC,>99.0% (GC)甲基烯酸異冰片酯 85-90%,含150-200 ppm MEHQ穩定劑

5′-IDP，2Na三乙胺 ≥99.0% (GC) 甲基烯酸異丁酯  99%,含15 - 20 ppm MEHQ穩定劑

5′-IDP，3Na三乙胺 色譜固定液，75℃+++++烯酸異丁酯 99%

5′-ITP，3Na三鹽酸鹽 98%甲基烯酸月桂酯 96%

dNTPs二氟氯98%α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩定劑

2′-Da二溴乙酯 97%α-甲基烯酸 Standard for GC

dAMP二氟酸鈉 97%α-甲基烯酸 CP，98%

高效氯氟菊酯標準溶液(100μg/ml,u=2%,基體:石油)CDK6 (DCS83) Mouse mAbNCK2/Nck beta  NCK銜接蛋白2抗體

高效氟氯菊酯(標準品)CDK6 (DCS83) Mouse mAbNck1/NCK alpha  NCK銜接蛋白1抗體

氟氯菊酯標準溶液(100μg/ml,u=4%,基體：正己烷)Phospho-Ack1 (Tyr284) AntibodyNCF1  嗜中性粒細胞胞漿因子1抗體

氟氯菊酯標準溶液(10μg/ml,u=5%,基體：正己烷)Acidic FGF (11H11) Rabbit mAbNCF/NCF4/p40phox  嗜中性粒細胞胞漿因子4抗體

氯菊酯(標準品)DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Alexa Fluor® 700 Conjugate)NCEH/AADACL1  中性膽固酯解酶1抗體

氯菊酯(分析標準品,99.7%)Phospho-Ezrin (Thr567)/Radixin (Thr564)/Moesin (Thr558) AntibodyNCE2  泛素結合酶E2F抗體

氯菊酯標準溶液(100μg/ml,u=3%)Phospho-Ezrin (Thr567)/Radixin (Thr564)/Moesin (Thr558) AntibodyNCC27/CLIC1  氯離子通道蛋白27抗體

氯菊酯標準溶液(10μg/ml,u=6%)Ezrin/Radixin/Moesin AntibodyNCAM2  神經(jīng)細胞粘附分子2抗體

四氯間苯二(98%)Ezrin/Radixin/Moesin AntibodyNBL1/DAND1  神經(jīng)母細胞瘤抑瘤蛋白1抗體

百菌清標準溶液(100μg/ml,u=4% ,,溶劑：石油)FoxA2/HNF3β AntibodyNav1.5/SCN5A  電壓門(mén)控鈉通道5α抗體
布氏岡比亞錐蟲(chóng)廠(chǎng)家缺氧誘導因子1α 抗體HIF-1αBuergerinin B中文名：別名：分子式：C9H14O5

組蛋白H3抗體Lamiide中文名：別名：分子式：C17H26O12

熱休克蛋白93抗體Durantoside II中文名：別名：分子式：C27H34O14

雞新城疫血凝素－神經(jīng)氨酸酶抗體Durantoside I中文名：別名：分子式：C26H32O13

組氨酸tRNA連接酶抗體Hydrangeside A dimethyl acetal中文名：別名：Hydrangeside A dimethyl ketal分子式：C33H46O14