旋毛蟲(chóng)通用PCR檢測試劑盒價(jià)格

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
β-DPN三(羥甲基)氨烷鹽酸鹽 99%Cbz-L-蘇氨酸芐酯 98%

β-DPNH三(羥甲基)氨烷鹽酸鹽 超純級N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸 4-叔丁酯二環(huán)己胺鹽  98%

NADH Inhibitor用于分子生物學(xué)和細胞培養，≥99.0% (AT)叔丁氧羰?；涟彼岫h(huán)己胺鹽   ≥98.5%

TPNN-乙基-N-（2-羥基-3-磺基）-3-胺鈉鹽 99%N-Boc-L-亮氨  97%

TPNH2 Na4N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸 99%4-溴咪唑 97%

Coenzyme Q10N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸 ≥99.5% (T)(溴甲基)環(huán)丁烷 98%

COA用于細胞培養級, ≥99.5%(T)4-氯-3-乙酮 80%

3C protease八烷基*基氯化銨 99%2-氯-3-甲酸 99%

Lysing Enzymes2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸 98%2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸鹽  99%

XylanaseN-三(羥甲基)甲氨基-2-羥基磺酸 99%3,5-二氯芐胺 97%

ASON-三(羥甲基)甲氨基-2-羥基磺酸 超純級D-2,4-二氨基丁酸 99%

Alcohol dehydrogenaseN-(3-磺基)-3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺鈉鹽 99%D-(-)-二乙酯 99%

Driselase三(羥甲基)甲基甘氨酸 for cell culture，≥99.5%(T) 2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸 98%

XODBiological stain，生化試劑級Fmoc-L-烯基甘氨酸 98%

SODBiological stain，生化試劑級4-氟-3-甲酸 98%

Thrombin溶性四氮唑-8 98%4-氟苯甲酰乙酸甲酯 98%

2-苯基苯酚(標準品)Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Nuclear Matrix Protein p84/NMP84   核基質(zhì)p84蛋白抗體

正戊(分析標準品,≥99.8%(GC))Jak1 (E3A6M) Rabbit mAbNUCKS1  核酪蛋白激酶和細胞周期蛋白依賴(lài)性激酶底物1抗體

菲標準溶液(395μg/mL,基體:甲)Cyclin H AntibodyNUBP2  核苷酸結合蛋白2抗體

菲(標準品)Cyclin H AntibodyNUBP1  核苷酸結合蛋白1抗體

標準溶液(1.00mg/ml,基體:甲)DAPK3/ZIPK AntibodyNUAK2  SNF1/AMP激酶相關(guān)激酶2抗體

吡啶(標準品)EpCAM (VU1D9) Mouse mAbNTN3/Netrin-3  軸突生長(cháng)誘導因子3抗體

3-氯聯(lián)苯(標準品)Phospho-PSD93 (Tyr340) AntibodyNtn1  軸突導向因子1抗體

4-氯聯(lián)苯(標準品)Bim (C34C5) Rabbit mAbNTF97/KPNB1  親核素β1抗體

2,2,5-三氯聯(lián)苯(標準品)Bim (C34C5) Rabbit mAbNTCP/SLC10A1  鈉離子/?；悄懰峁厕D運蛋白

2,2,5,5-四氯聯(lián)苯(標準品)Histone H2B (53H3) Mouse mAbNTAL  B淋巴細胞鏈接激活蛋白抗體
旋毛蟲(chóng)通用PCR檢測試劑盒價(jià)格4,4'-Dimethyl-2,2'-dipyridyl,99%通用試劑　1G

4-Acetylpyridine,97%通用試劑　5G

3-Acetylpyridine,98%通用試劑　25G

2-Acetylpyridine,≥99%通用試劑　25G

2-Vinylpyridine,97%通用試劑　25ML

5-Ethyl-2-pyridineethal,98%通用試劑　5G

4-Ethylpyridine,98%通用試劑　25ML

1-(2-Hydroxyethyl)piperidine,99%通用試劑　100G

Acridine hydrochloride,98%通用試劑　1G

Pyridine hydrochloride,≥98.0%通用試劑　25G

3-Picoline,99%通用試劑　100ML

4-Dimethylamipyridine, ≥99%通用試劑　25G

2,4-Lutidine,99%通用試劑　25ML

2,6-Lutidine,99%通用試劑　25ML

2,3-Lutidine,99%通用試劑　25ML