高首鱘虹彩病毒PCR檢測試劑盒規格

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Barbituric acidFmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%甲酸甲酯 95%

Parafuchsin hydrochlorideFmoc-O-磷酸基-L-酪氨酸 98%甲酸甲酯 分析標準品,≥99.8% (GC)

Nitroso R saltFmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%甲酸甲酯 99%,光譜純

DithizoneFMOC-L-纈氨酸五氟苯酯  98.0%甲酸甲酯 99%

CurcuminFMOC-L-苯氨酸五氟苯酯  96%結晶四氯化錫  99.995% metals basis

Fast Violet B SaltN-甲酰-DL-色氨酸 98%2-甲氧基萘  98%

4-Dimethylamibenzal rhodanineN-Fmoc-N'-Boc-L-2,3-二氨基酸   97%2-氨基-1,3- 98%

DNSClFmoc-D-3-(1-萘基)氨酸 ≥98.5%絲氨鹽酸鹽 98%

1-NaphthylamineFmoc-3-(1-萘基)-L-氨酸 98%2,6-二氯-4-氨基苯酚 98%

Nuclear fast redFmoc-3-(2-萘基)-D-氨酸 98%鄰氨基苯酚 98%

Chrome Blue KFmoc-3-(2-萘基)-L-氨酸 98%3-氨基-4-羥基苯甲酸 97%

 Ammonium metavanadateFMOC-D-3-(3-吡啶基)-氨酸 98%鄰氨基對叔丁基酚 98%

1,8-ANSFmoc-L-瓜氨酸 98%苯甲酰 98%

DMTDFmoc-3-L-氨基丁酸 98%2-(溴甲基)萘 98%

Oracet blue B(3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酸 96% 2,5-二苯基噁唑 99%, 閃爍級

Calconcarboxylic acidFmoc-L-β-谷氨酸-5-叔丁基酯   98%2，6-二氯-4-酚 98%

四甲基硫酸氫銨(離子色譜級,≥99.0%(T))α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Cy5  Cy5標記的小鼠抗牛IgG

三乙胺(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))Drosha (D30F3) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Cy3  Cy3標記的小鼠抗牛IgG

四乙基溴化銨(離子對色譜級)MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Bio  生物素標記的小鼠抗牛IgG

四丁基化銨(離子對色譜級)eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/APC  APC標記的小鼠抗牛IgG

三辛胺(離子對試劑)eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗牛IgG

甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))eIF3H (D9C1) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的小鼠抗牛IgG

1-己烷磺酸鈉(離子對色譜級,>98.0%(T))HIF-1β/ARNT (C15A11) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的小鼠抗牛IgG

高氯酸鈉，無(wú)(for HPLC,99.0%)Acetyl-Histone H2B (Lys20) (D7O9W) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的小鼠抗牛IgG

四甲基溴化銨(離子對色譜級,≥99.0%(AT))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的小鼠抗牛IgG

三溴(光譜級,>99.0%(GC))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG  小鼠抗牛IgG
高首鱘虹彩病毒PCR檢測試劑盒規格肝細胞粘附分子抗體ent-16β,17-Dihydroxykauran-19-oic acid中文名：別名：分子式：C20H32O4

禽流感H5亞型全病毒抗體9-Hydroxy-13E-labden-15-oic acid中文名：別名：分子式：C20H34O3

17-β-羥脫氫酶6抗體Scutebata G中文名：別名：分子式：C40H419

組胺受體H2抗體Carsol中文名：鼠尾草酚別名：Picrosalvin分子式：C20H26O4

同源盒蛋白HOXA11抗體Bonducellpin C中文名：別名：分子式：C23H32O7