擬態(tài)弧菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Sudan I4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-氨基)甲基]苯氧乙酸 98% 10μg/ml,u=6～5%，酮

Sudan black BN-芴甲氧羰基-L-2,3-氨基酸  97%敵稗 分析標準品，98%

Sudan red 7BN,N'-二叔丁氧羰基-L-組氨酸 BR敵稗標準溶液 100μg/ml,u=3%

BBIHL-2,4-二氨基丁酸酸鹽 98%敵稗標準溶液 10μg/ml,u=4%

Hoechst 33342D-2,4-二氨基丁酸 99%伏殺硫磷標準溶液 10μg/ml,u=7～3%，酮

Fluorescein3,5-二-L-酪氨酸 BR伏殺硫磷標準溶液 100μg/ml,u=7～3%，酮

Fluorescein disodium salt3,5-二硝基-L-酪氨酸 98%克螨特 分析標準品，91%

DAPI乙酰氨基二酸二乙酯  98%克螨特標準溶液 100μg/ml,u=3%

Phelphthalein2-羥甲基-3,4-二氫吡喃 97%克螨特標準溶液 10μg/ml,u=4%

Phelphthalein test paperD-精氨酰胺 98%磷胺標準溶液 100μg/ml,u=4%（）

PhelphthalexoneDHP HM Resin 0.5~1.1mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB磷胺標準溶液 10μg/ml,u=6%（）

Thymol內皮素-1 ≥97.0% (HPLC)哌草磷 分析標準品，93%

Rhodamine 123Exendin Fragment 9-39 ≥95% (HPLC)三氯殺蟲(chóng)酯標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:異

Rhodamine BO-[(乙氧基羰基)胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟酸鹽  98%三氯殺蟲(chóng)酯標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:異

TMB艾塞那肽  97%異草胺 分析標準品，94%

3,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid-1 componentN-(反式-環(huán)氧丁二?；?-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺  99%甲基嘧啶磷 100μg/ml,u=2%

二氯(光譜級,≥99.9%,含50-150ppm戊烯穩定劑)SEK1 (5C10) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/FITC  FITC標記的小鼠抗人IgG

1,4-二氧六環(huán)(光譜純,≥99.5%)Nestin (10C2) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/Cy7  Cy7標記的小鼠抗人IgG

1,2-二氯乙烷(for spectroscopy,≥99.8%（GC))Synaptotagmin-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的小鼠抗人IgG

N,N-二甲基乙酰胺(光譜級,≥99.8%(GC))BOB-1/OBF-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5  Cy5標記的小鼠抗人IgG

鄰二氯苯(光譜純,99%)Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/Cy3  Cy3標記的小鼠抗人IgG

二甲基亞砜(ACS,光譜級)SGTA AntibodyMouse Anti-human IgG/Bio  生物素標記的小鼠抗人IgG

乙(光譜純,≥99.8%)ApoA1 (5F4) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/APC  APC標記的小鼠抗人IgG

乙酸乙酯(ACS 光譜級,≥99.5%)UTX (D3Q1I) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗人IgG

異辛烷(光譜純)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgG

乙二(光譜純 ,≥99%)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgG
擬態(tài)弧菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家CD73抗體2',5'-Dihydroxyacetophene中文名：2,5-二羥基苯乙酮別名：2,5-Dihydroxyacetophene; Quinacetophene分子式：C8H8O3

神經(jīng)細胞粘附分子CALL抗體8-Glucosyl-5,7-dihydroxy-2-(1-methylpropyl)chromone中文名：別名：分子式：C19H24O9

6型膠原蛋白α5抗體Dehydroperilloxin中文名：別名：分子式：C16H16O4

接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體4-O-Methylgrifolic acid中文名：別名：分子式：C24H34O4

CD24抗體3,4,5-Trimethoxyphenyl-(6'-O-galloyl)-O-β-D-glucopyraside中文名：別名：分子式：C22H26O13