黃頭病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Octyltrimethylammonium chloride亮抑酶酞 ≥90% (HPLC漆黃素 98%

SB3-8L-亮氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%高良姜素 分析標準品，≥99%

SB3-10D-亮氨酸甲酯鹽酸鹽 98%藤黃酸 97% (HPLC)

Benzyltrimethylammonium bromideD-亮氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%京尼平甙  分析標準品，≥98%

3-(2-Amiethylami)propyldimethoxymethylsilaneBoc-Lys(Boc)-ONp 97%銀杏內酯B 分析標準品,≥99%(HPLC)

Polyquaternium-10Boc-Lys(Z)-OSu 98%銀杏內酯 C 分析標準品，≥99%

THAMN-(叔丁氧羰基)-D-賴(lài)氨酸  98%沒(méi)食子酸，一物 AR,98.5%

BIS-TRIS propaneN-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]-N'-[(2-烯氧基)羰基]-L-賴(lài)氨酸  95%人參皂甙 Rb2 分析標準品

TRIS-HC1N-芴甲氧羰基-N'-[1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環(huán)己基亞甲基)-3-甲人參皂甙 Rh2 分析標準品，>98%

TRIS acetate saltZ-丁氧羰基賴(lài)氨酸 98%人參皂甙 Rg1 分析標準品，>98%

Tris carbonateH-Leu-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh人參皂甙 Rg2 分析標準品，>98%

CAPSH-Lys(Boc)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh人參皂甙 Rg3 分析標準品，>98%

CAPSOFmoc-Leu-Wang resin 100-200 mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/g人參皂甙 Rc  分析標準品，>98%

CAPSO sodium saltFmoc-Lys(Boc)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB人參皂甙 Rd  分析標準品，>98%

CAPS Sodium saltL-亮氨酸-4-胺 99%人參皂甙 Re 分析標準品，>98%

PIPESL-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽 98%人參皂苷Rh1 分析標準品，≥98%

2,3-二甲基丁烷(Standard for GC,>99.5%(GC))HGK AntibodyMIDN  中腦核仁蛋白抗體

甲(Standard for GC)AQP2 AntibodyMidkine  中期因子/肝素結合生長(cháng)因子抗體

甲酸(Standard for GC,>99%)Phospho-HSP90α (Thr5/7) AntibodyMID2/RNF60/Midline-2  環(huán)指蛋白60抗體

呋喃(standard for GC,≥99.5%(GC))MSK1 (C27B2) Rabbit mAbMID1/Midline-1/RNF59  環(huán)指蛋白59抗體

正庚烷(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C) Rabbit mAbMICS1  生長(cháng)激素誘導跨膜蛋白抗體（源性蛋白2）

正庚(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C) Rabbit mAbMicrosporidia protien  蜜蜂微孢子蟲(chóng)蛋白抗體

γ -?。℅BL）(standard for GC,≥99.9%(GC))Phospho-CrkII (Tyr221) AntibodyMicrocephalin 1/BRIT1  小腦癥基因1/認知相關(guān)蛋白抗體

1-己烯(Standard for GC)PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific) (Alexa Fluor® 488 Conjugate)MICB  MHC I類(lèi)鏈相關(guān)蛋白B

正己烷(Standard for GC,>99.5%(GC))CrkII AntibodyMICA/MHC I  MHC I類(lèi)鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復合物1抗體

六氯乙烷(Standard for GC, ≥99.5% (GC))RIP (D94C12) XP® Rabbit mAbMIC1/C18orf8  結腸癌相關(guān)蛋白MIC1抗體
黃頭病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)異戊烯焦磷酸1抗體Euonymine中文名：別名：分子式：C38H4718

胰島素誘導基因1抗體1-O-Acetyl-6α-O-(2-methylbutyryl)britannilactone中文名：別名：1-Acetoxy-6α-(2-methylbutyryloxy)eriolalide分子式：C22H32O6

胰島素樣生長(cháng)因子結合蛋白7抗體2α,9α,11-Trihydroxy-6-oxodrim-7-ene中文名：別名：分子式：C15H24O4

胰島素樣生長(cháng)因子結合蛋白6抗體Ustusol A中文名：別名：分子式：C15H24O4

IgLON家族蛋白5抗體1-O-Acetylbritannilactone中文名：1-O-乙?；蠡ㄐ不▋弱e名：Inulicin分子式：C17H24O5