花生PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
枸櫞酸托瑞米芬C15H10O42-甲基-6-吡啶

枸櫞酸托瑞米芬（標準品）C14H8O4(2R)-1-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]六羥基哌啶-2-甲酸

異環(huán)酰C24H38O46-(1-甲基氧基)-吡啶甲

異環(huán)酰（標準品）C7H6O3普瑞巴林

鹽酸普拉克索C9H10O32-溴-1-(三氟甲氧基)基酮

鹽酸普拉克索（標準品）C9H10O3五

硫酸長(cháng)春C6H6O2異氧基酸

硫酸長(cháng)春(標準品)C8H8O42,6-二

硫酸長(cháng)春(進(jìn)分)C30H50O7-氧雜二環(huán)[4,1,0]庚烷-羧酸

替莫唑C20H19-基-6,7,8-三氟-1,二氫-氧代-喹啉甲酸酯

替莫唑(標準品)C30H45ClO62-溴代異丁酸甲酯

氨魯米特C44H70O232-氧基-2-氧基二

氨魯米特（標準品）C10H10O4氮雜吲哚-2-甲酸酯

氟他C13H10O56--甲基-4,5-二氨基嘧啶

氟他（標準品）C21H20O92,二氟甲酸甲酯

環(huán)酰C9H10O4溴-2-羥基吡啶

環(huán)酰（標準品）C9H6O45-溴-氟-2-羥基甲

醋酸地塞米松C16H18O9次硝酸鉍

蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)ELISA試劑盒Axin1  軸蛋白1100 ul

嘌呤核苷酸酸化酶(PNP)ELISA試劑盒Anei-ATX  自分泌運動(dòng)因子100 ul

皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒Aurora A  有絲分裂激酶A100 ul

皮質(zhì)(Cortisol)ELISA試劑盒Aurora B  有絲分裂激酶B100 ug

牛小腸性酸酶(CIAP)ELISA試劑盒Aurora C  有絲分裂激酶B100 ul

凝血因子XIII B(F13B)ELISA試劑盒Aurora A/B/C  有絲分裂激酶A/B/C100 ul

凝血因子XIII A1(F13A1)ELISA試劑盒B7-H1/CD274  程序性死亡配體1100 ul

凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)ELISA試劑盒B7-DC/CD273  程序性死亡配體2100 ul

凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA試劑盒ICOS-L/B7-H2/CD275  誘導協(xié)同刺激分子配體CD275100 ul
花生PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)絲氨酸羧甲半胱氨酸合成酶抗體13-O-p-Coumaroylplumieride中文名：別名：分子式：C30H32O14

癌細胞高表達蛋白Hec1抗體Plumieride中文名：別名：分子式：C21H26O12

肝癌上調蛋白抗體6-O-Syringoylajugol中文名：別名：分子式：C24H32O13

HRAS樣抑制因子3抗體6-O-Cinnamoylcatalpol中文名：別名：分子式：C24H28O11

HEAT重復內含蛋白7A蛋白抗體Minecoside中文名：別名：6-O-trans-Isoferuloylcatalpol分子式：C25H30O13