牛呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
三氧化二鉻(>99%，BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb溴-2-硝基三氟

四氧化三鈷(>99%，BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb甲酸酯

酸鈷四水(>99.5%,BR)UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb甲酰-2-酸酯

鈷粉(>99%，BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb氧基甲酸

銅粉(>99.5%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-磺酰

式碳酸銅(銅純度：52.5~56.5%)LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-氟

氧化銅粉(>99%,BR)LSm2 (D9X6C) Rabbit mAb十二烷基噻吩

焦銅iNOS (D6B6S) Rabbit mAb2,二羥基-甲

銅三水(>98%,BR)Phospho-SQSTM1/p62 (Thr269/Ser272) Antibody5-溴-甲基-1H-吲唑

2'-脫氧腺苷5'二酸三鈉鹽(>97%,BR)PFKFB3 (D7H4Q) Rabbit mAb?；?7(1H)-氮雜吲哚

2'-脫氧胞苷-5'-二酸三鈉鹽(分子生物學(xué)級)PathScan® Phospho-HER4/ErbB4 (panTyr) Sandwich ELISA Kit2-溴-1,二-5-氟

(>98%,BR)IFITM1 Antibody酸

DMPPathScan® Total HIF-1α Sandwich ELISA Kit8-硝基喹啉

沒(méi)食子酸月桂酯(>98.5%,BR)Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb氨基-5-三氟甲

dUMP;2'-脫氧尿苷-5'-酸二鈉鹽MT1-MMP (D1E4) Rabbit mAb2-溴-6-并噻唑

鹽酸鹽(>98%,BR)MMP-2 (D8N9Y) Rabbit mAb1-己基-2,二甲基咪唑三氟甲磺酸鹽

呋喃三二鈉鹽TRF2 (D1Y5D) Rabbit mAb芐基二膦

吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)SignalSilence® IRF-7 siRNA I5-溴-2-甲氧基甲

環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒TBX2/T-box2   血栓素B2(一種新發(fā)現的抑癌基因)100 ul

環(huán)酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒FSH receptor  促卵泡刺激素受體100 ul

環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒Follistatin  卵泡抑素100 ul

踝蛋白(talin)ELISA試劑盒FSP/Spastin  纖維母細胞表面蛋白100 ul

花生四酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)ELISA試劑盒FSH  促卵泡刺激素100 ul

花生四酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)ELISA試劑盒FHIT  脆性組氨酸三聯(lián)體20 ul

花生四酸12 - 脂氧合酶，12S型(ALOX12/LOG12)ELISA試劑盒Phospho-FHIT (Tyr114)  酸化脆性組氨酸三聯(lián)體500 ul

花生四酸(AA)ELISA試劑盒G proin beta subunit GI  G蛋白/鳥(niǎo)苷酸結合蛋白100 ul

琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)ELISA試劑盒SLK/Fyn  酪氨酸蛋白激酶Fyn（同步原癌基因）1 Kit
牛呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)肌動(dòng)蛋白結合蛋白LIM蛋白3抗體Tyramine hydrochloride中文名：酪胺鹽酸鹽別名：分子式：C8H12

磷酸化CD156b抗體Trolline中文名：金蓮花堿別名：(±)-Trolline分子式：C12H133

乙醇脫氫酶5抗體5-Carboxystrictosidine中文名：別名：(5S)-5-Carboxystrictosidine分子式：C28H34N2O11

乙醇脫氫酶6抗體4,5-Dihydropiperlonguminine中文名：二氫蓽茇明寧堿別名：Dihydropiperlonguminine分子式：C16H213

遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體14-O-Acetylneoline中文名：14-O-乙?；釆W寧別名：14-Acetylneoline; Bullatine C分子式：C26H417