禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
DMSPlac8 (E1J2Z) Rabbit mAb5-氟-2-三氟甲

D-正亮氨酸(>99%,BC)Galectin-1/LGALS1 (D608T) Rabbit mAb (IHC Formulad)羰基-3,二氫-2H-1,并噻-6-羧酸甲酯

鹽酸多巴PLD2 (E1Y9L) Rabbit mAb (IHC Specific)5-溴-2-

DSIF5 (D5G9) Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-甲

2'-脫氧尿苷-5'-三酸三鈉鹽Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb2-巰基氧基

四氫甲基嘧啶羧酸(>98%，BR)Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb5--2-氟-吡啶

氧化鎂碳酸鈉合劑SimpleChIP® Mouse PER1 Intron 1 Primers2-氟-甲酸

(>98%,BR)PLD2 (E1Y9G) Rabbit mAb10,10-二甲基蒽酮

L-酸酯(>99%,GC)PathScan® Total BACE Sandwich ELISA Kit胍鹽酸鹽

溴烷(>98%,BR)Phospho-TRAF2 (Ser11) (E2B6L) Rabbit mAb溴氟甲基膦酸二酯

月桂酸酯(>98%,BR)PathScan® Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) Sandwich ELISA Kit2,二溴-1-萘酚

基曙紅(>95%,BS)CAMLG (D5L9J) Rabbit mAb7-甲氧基吲哚

沒(méi)食子酸酯eRF1 Antibody溴-5-甲

煙酸酯(>98%,BR)CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAb3,5-二-氟

二茂鐵CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAb5-溴吲哚-酸

反環(huán)鹽酸鹽；單氧化酶(MAO)抑制劑Histone H4 (D2X4V) Rabbit mAb氟-甲氧基甲酸

黃酸(>96.5%，BS)PSMC3/TBP1 Antibody二羥茶

40%氟酸水溶液(39.0~41.0%,BC)ATR (E1S3S) Rabbit mAb對氟硫酚

鈣激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA試劑盒HSA  血清白蛋白100 ul

鈣調素特異(CAM-ab)ELISA試劑盒KCNH1/EAG1  鉀離子通道蛋白EAG1100 ul

鈣調酸酶(CaN)ELISA試劑盒HERG/KCNH2/ERG  特異性鉀離子通道蛋白100 ul

鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒HAVCR1/TIM1  甲型肝炎病毒細胞受體1100 ul

鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA試劑盒HA tag  HA tag標簽100 ul

鈣蛋白酶抑素(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒HA tag  HA tag標簽100 ul

鈣蛋白酶2(M/II)大亞基(CAPN2)(CAPN2)ELISA試劑盒HA tag  HA tag標簽100 ul

鈣/鈣調素依賴(lài)性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA試劑盒HAI-1  肝細胞生長(cháng)因子激活物抑制劑100 ul

富組蛋白(histatin-5)ELISA試劑盒HBsAg  肝表面抗原（包被）100 ul
禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)20號染色體開(kāi)放閱讀框106抗體1,2,3,7-Tetramethoxyxanthone中文名：1,2,3,7-四甲氧基呫噸酮別名：分子式：C17H16O6

20號染色體開(kāi)放閱讀框107抗體1,7-Dihydroxy-2,3-dimethoxyxanthone中文名：1,7-二羥基-2,3-二甲氧基呫噸酮別名：分子式：C15H12O6

20號染色體開(kāi)放閱讀框117抗體1,2,3,6,7-Pentamethoxyxanthone中文名：1,2,3,6,7-五甲氧基呫噸酮別名：分子式：C18H18O7

20號染色體開(kāi)放閱讀框118抗體1,7-Dimethoxy-2,3-methylenedioxyxanthone中文名：1,7-二甲氧基-2,3-亞甲二氧基呫噸酮別名：分子式：C16H12O6

20號染色體開(kāi)放閱讀框144抗體1,7-Dihydroxy-2,3-methylenedioxyxanthone中文名：1,7-二羥基-2,3-亞甲二氧基呫噸酮別名：分子式：C14H8O6