人核糖核酸酶P基因PCR測定試劑盒規格

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
利谷?。藴势罚?/font>CDC20 (D6C2Q) Rabbit mAb(三氟甲基)甲酸酯

滅蟻靈（標準品）Sec61A1 (D4K2Z) Rabbit mAb1-(氟基)哌鹽酸鹽

噻草（標準品）Sec61A1 (D7Q6V) Rabbit mAb2-羥基-溴甲酸

甲磺隆標準溶液（10μg/ml,u=4%）MLLT1/ENL (D9M4B) Rabbit mAb1-芐基-基-基哌啶鹽酸鹽

四聚（標準品）COBRA1 (D6K9A) Rabbit mAb7-甲基吲哚-甲

異甲草（標準品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb(S)-2,5-二氫-3,6-二甲氧基-2-異基吡

甲霜靈（標準品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbN-羥基脒

標準溶液（100μg/ml,u=4%）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-7-氮雜吲哚

標準溶液（1.00mg/ml,基體：甲）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-甲氧基

甲氧滴滴涕（標準品）USP9X (D4Y7W) Rabbit mAb6-甲基喹喔啉

甲氧?。藴势罚?/font>SimpleChIP® Human 28S rDNA Repeat Primers(溴?；?吡啶鹽

滅草?。藴势罚?/font>SF2/ASF (D1N3S) Rabbit mAb5-硝基愈創(chuàng )木酚鈉

滅多（標準品）β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)-6,7-二(2-甲氧基氧基)喹唑啉

煙嘧磺?。藴势罚?/font>HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-甲硫基并噻唑

戊硫（標準品）SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers二

甲酸銨（色譜級）Lipin 1 (D2W9G) Rabbit mAb-4'-甲氧基酮

Amberli IR-120陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（鈉型）Thioredoxin 2 (D1C9L) Rabbit mAb4,5-二氨基-1-(2-羥基)吡唑硫酸鹽

酸戊酯（標準品）SF2/ASF (D6S7V) Rabbit mAb賴(lài)諾普利

垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISA試劑盒Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180)  酸化KB抑制蛋白激酶α/β100 ul

垂草扁桃酸(VMA)ELISA試劑盒phospho-IKB alpha (Ser32/36)  酸化IKB alpha(Ser32/36)100 ul

穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA試劑盒phospho-IKK beta (Tyr188)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性細胞死亡因子4(PDCD4)ELISA試劑盒phospho-IKK beta (Tyr466)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性死亡因子配體1(PD-L1/CD274)ELISA試劑盒phospho-IKK beta (Tyr199)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性死亡-1(PD-1)ELISA試劑盒phospho-IKK gamma (Ser85)  酸化KB抑制蛋白激酶γ100 ul

成纖維細胞生長(cháng)因子9(FGF9)ELISA試劑盒phospho-IKK gamma (Ser31)  酸化KB抑制蛋白激酶γ150 mg

成纖維細胞生長(cháng)因子8(FGF8)ELISA試劑盒phospho-IKK gamma (Ser376)  酸化KB抑制蛋白激酶γ1 mg

成纖維細胞生長(cháng)因子6(FGF6)ELISA試劑盒IKI3 family proin  擬南芥IKI35 mg
人核糖核酸酶P基因PCR測定試劑盒規格甘氨酸-N-甲基轉移酶Baccatin VI中文名：巴卡亭VI別名：分子式：C37H46O14

谷胱甘肽硫轉移酶ω1抗體9-Deacetyltaxinine E中文名：別名：分子式：C35H44O9

GATA結合蛋白4抗體Jolkilide A中文名：巖大戟內酯A別名：分子式：C20H26O3

慶大霉素單克隆抗體Taxuspine X中文名：別名：分子式：C41H50O14

甘氨酸受體alpha 1/2/3型抗體Taxuspine B中文名：別名：分子式：C35H42O10