玉米TPCR檢測試劑盒規格

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
四甲基硅烷[>99.0%(GC),用于核磁共振]Phospho-M-CSF Receptor (Tyr809) Antibody氨基-2-甲氧基吡啶

(*基硅基)-1-磺酸鈉(>98.0%(T))Phospho-M-CSF Receptor (Tyr723) (49C10) Rabbit mAb2-溴-5-代

三氟化-絡(luò )合物(>98.0%(W))Progesrone Receptor B (C1A2) Rabbit mAb芐氧基吲哚

二甲基硒(>98.0%(GC))IFN-γ (3F1E3) Mouse mAb甲基三氧基硅烷

六氟(>99.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) Antibody溴-3,5-二氟

四甲基錫(>96.0%(GC))PDGF Receptor β Antibody3,二甲氧基酚

二二茂鋯(>97.0%(T))PDGF Receptor α Antibody1,2,三-5-

Chirabi-AR[用于核磁共振]cGAS (D3O8O) Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氨基-5-硝基-2'-二甲酮

三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)鐠(III)(＞98%(T))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb2,6-二芐

三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)銪(III)(＞95%(T))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb(三氟甲基)吡唑

三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮基)鐠(Ⅲ)(>97.0%(T))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) (88H8) Mouse mAb2-溴-1--氟

(S)-(+)-1,1'-聯(lián)萘基-2,2'-雙酸氫酯(>97.0%(T))FTO (D6Z8W) Rabbit mAbN-酰-L-氨酸

(R,R)-(-)-2,丁二(>96.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr740) (32A9) Rabbit mAbN-芐氧羰基-L-亮氨酸

(S,S)-(+)-2,丁二(>97.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr740) (32A9) Rabbit mAb()酸

(+)-芐甲基硅基酸(>98.0%(T))PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb2-甲氧基-氨基吡啶

(-)-芐甲基硅基酸(>98.0%(T))PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb氨基-2-甲氧基吡啶

(-)-樟腦烷酸(>98.0%(T))Phospho-PDGF Receptor α (Tyr849)/PDGF Receptor β (Tyr857) (C43E9) Rabbit mAb2-溴-5-代

(R)-(-)-N-(3,5-二甲酰)-α-Phospho-PDGF Receptor α (Tyr849)/PDGF Receptor β (Tyr857) (C43E9) Rabbit mAb芐氧基吲哚

雞表皮生長(cháng)因子(EGF)ELISA試劑盒Pin1  肽基脯氨酞順?lè )串悩嬅窹inl100 ul

雞半糖凝集素-3(Gal-3)ELISA試劑盒Phospho-Pin1 (Ser16)  酸化肽基脯氨酞順?lè )串悩嬅窹inl20 ul

雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒PIWIL1  piwi樣1蛋白100 ul

雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒PKA  蛋白激酶A20 ul

雞白介素8(IL-8)ELISA試劑盒Phospho-PKA C (Thr197)  酸化蛋白激酶C亞性100 ul

雞白介素6受體(IL-6R)ELISA試劑盒PKB/AKT-1  蛋白激酶B（來(lái)源）20 ul

雞白介素6(IL-6)ELISA試劑盒PLASTIN3/T Plastin  絲束蛋白T Plastin100 ul

雞白介素4(IL-4)ELISA試劑盒PLC beta 3/Phospholipase C beta 3  酯酶Cβ320 ul

雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒Phospho-PLC beta3 (Ser537)  酸化酯酶Cβ3500µl
玉米TPCR檢測試劑盒規格9號染色體開(kāi)放閱讀框57抗體3,4'-Dihydroxy-3',5,7-trimethoxyflavan中文名：別名：分子式：C18H20O6

9號染色體開(kāi)放閱讀框6抗體5,7-Diacetoxyflavone中文名：別名：分子式：C19H14O6

9號染色體開(kāi)放閱讀框62抗體Wogonin中文名：漢黃芩素別名：5,7-Dihydroxy-8-methoxyflavone分子式：C16H12O5

9號染色體開(kāi)放閱讀框64抗體Amarol A中文名：別名：分子式：C15H12O8

9號染色體開(kāi)放閱讀框66抗體5-Acetoxy-7-hydroxyflavone中文名：別名：分子式：C17H12O5
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。