一步法RT-PCR試劑盒

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
吉拉德試劑 P(>95.0%(T))MCM4 Antibody2,2-二氟-2-溴酰

2-肼基吡啶(>98.0%(GC)(T))Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb2-氨基-氟吡啶

2-肼鹽酸鹽(>98.0%(T))Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb2-溴-5-甲酸

基-1,2,三唑啉-3,5-二酮(含氮量：23.50-24.30 %)Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb1-甲基胍鹽酸鹽

[3,5-二甲基-(硝基芐氧基)基]-氧代丁酸琥珀酰亞酯(>96.0%(HPLC))Phospho-Gab1 (Tyr627) Antibody基-1,磺酸內酯

異酸對甲磺酰酯(>95.0%(T))Gab1 Antibody硝地平

N-叔丁基-α-基硝酮(>98.0%(HPLC)(T))Gab1 Antibody2-氟-5-甲?；?/span>

N-叔丁基-α-(吡啶基-1-氧)硝酮(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb氟-

5,5-二甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>97.0%(GC)(T))Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb5-芐硫基四氮唑

5-(二氧基酰)-5-甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>98.0%(N))Autophagy Vesicle Elongation (Atg12 Conjugation) Antibody Sampler Kit2-羥基-硝基-甲基吡啶

亞(>98.0%(GC))SPHK2 (D2V3G) Rabbit mAb2-氨基-甲基-5-硝基吡啶

2,4,6-三叔丁基亞(>98.0%(GC))Phospho-Gab1 (Tyr307) Antibody2-溴基酮

3,3,5,5-四甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>98.0%(GC))Phospho-Gab1 (Tyr307) Antibody鹽酸羥

氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧自由基(>97.0%(GC))SKAR Antibody[-(三氟甲基)基]-哌啶

酰氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))TFEB (D4L2P) Rabbit mAb3,4,5-三溴

羧基-2,2,5,5-四甲基吡咯烷-1-氧基自由基(>98.0%(HPLC)(T))α-E-Canin Antibody3,5-二溴-2-羥基吡

羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))α-E-Canin AntibodyBOC-胍

(2-酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>96.0%(HPLC))Profilin-1 Antibody3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酸酯

雞5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒PNK1/PNKP  多聚合苷酸激酶3酸化酶100 ul

雞Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118)  酸化多聚合苷酸激酶3酸化酶20 ul

雞Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒Podoplanin/gp36  平足蛋白100 ul

雞17-酮類(lèi)固(17-KS)ELISA試劑盒Pokemon  蒙蛋白100 ul

雞17羥皮質(zhì)類(lèi)固(17-OHCS)ELISA試劑盒Polycystin 1  多囊腎蛋白1100 ul

雞13,14二氫15-酮F2α(PGFM)ELISA試劑盒Polycystin 2  多囊腎蛋白2100 ul

ELISA試劑盒PP-1B  蛋白酸酯酶-1B100 ul

可溶性白介素-2 受體(sIL-2R)ELISA試劑盒PP2A alpha  蛋白質(zhì)酸酶-2A100 ul

可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒PP2A alpha  蛋白質(zhì)酸酶-2A20 ul
一步法RT-PCR試劑盒人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Leukotriene C4，LT-C4 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human leukotriene D4，LT-D4 ELISA Kit*

人白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human leukotriene E4，LT-E4 ELISA Kit *

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Candida Albicans，C.albicans ELISA Kit*

人白細胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human leukocyte exastase，HLE ELISA Kit*

人白細胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISA Kit*小鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒      組裝/原裝