非洲馬瘟病毒RT-LAMP檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

參數規格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：非洲馬瘟病毒RT-LAMP檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文名稱(chēng)：RT-LAMP kit for African equine plague virus
貨號：LZ-L87410
產(chǎn)品規格：50次
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應，無(wú)非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

 儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
優(yōu)勢：
   1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保
所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢測。
   2.   重現性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證。
   3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現對其的直接檢測，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
   4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
   5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
   6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。

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TOV21G人卵巢癌細胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%
大鼠腎小球系膜細胞hbzy-1 Rat mesangial cell hbzy-1 DMEM(高糖）+10%FBS(或者EMEM+10%FBS)
MLE-12小鼠肺上皮細胞株 MLE-12 mouse lung epithelial cell lines DMEM/F12+2%FBS
MA104非洲綠猴胚胎腎上皮細胞 MA104 Africa green monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS　
NCI-H266人非小細胞肺癌細胞 NCI-H266 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS
MCA38小鼠結腸癌細胞 MCA38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS
NCI-H23人非小細胞肺癌細胞 NCI-H23 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS
LTPA小鼠胰腺癌細胞 LTPA mouse pancreatic cancer cells 1640+10%FBS
BALL-1人B淋巴細胞急性白血病細胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640（內含2mM L-glutamine）+10%胎牛血清
AML-12小鼠正常肝細胞 Normal liver cells of AML-12 mice DMEM+10%FBS
HCC-LM3人肝癌細胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS
MC38小鼠結腸癌細胞 MC38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS
Caki-2 人腎透明細胞癌細胞 Caki-2 human renal clear cell carcinoma cells McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS
BV-2小鼠小膠質(zhì)細胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS
PCR實(shí)驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。