VEGF血管內皮細胞生長(cháng)因子ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

大鼠巨噬炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)試劑盒 紅滲透脆性試劑盒(Parpart比色法)N-叔丁氧羰-N'-苯磺酰-L-精氨 BRN-乙酰-D-半乳糖 98%

兔子組織型纖溶原激活劑(t-PA)試劑盒紅孵育滲透脆性試劑盒(比色法)BOC-對磺酰-D-精氨  98%腺2′:3′-循環(huán)磷鈉鹽 97%

兔子組織型纖溶原激活劑(t-PA)試劑盒一氧化碳血紅蛋白定性試劑盒叔丁氧羰-N-beta-三苯-L-天門(mén)冬酰  98%硝呋喃代謝物 分析標準品

兔核因子κB亞p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒一氧化碳血紅蛋白試劑盒(微板法)BOC-L-天門(mén)冬酰 4-酯 98%二苯環(huán)烯 98%

兔核因子κB亞p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒一氧化碳血紅蛋白試劑盒(比色法)叔丁氧羰-D-天冬氨 4-芐酯 98%DL-阿拉伯糖 98%

兔粒集落激因子(G-CSF)試劑盒一氧化碳血紅蛋白試劑盒(比色法)叔丁氧羰酰D-天冬氨Β-環(huán)己酯 98%L-(-)-阿拉伯糖 99%

兔粒集落激因子(G-CSF)試劑盒蔗糖水溶血定性試劑盒(過(guò)篩法)三吡咯烷溴化鏻六氟磷鹽 98%8-氨-2-萘酚 98%

兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒蔗糖水溶血定性試劑盒(過(guò)篩法)Boc-3-(2-吡啶)-L-氨 98%2,3,4,6-四-o-乙酰-α-D-氟化吡喃葡萄糖 98%

兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒蔗糖溶血試劑盒(微板法)叔丁氧羰-L-谷氨 5-環(huán)己酯 98%5-溴-4--3-吲哚-beta-D-葡糖環(huán)己鹽 99%

兔結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒蔗糖溶血試劑盒(比色法)Boc-O-芐-D-蘇氨 98%5-溴-4--3-吲哚磷酯對苯鹽 ≥99% (HPLC)

兔結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒蔗糖溶血試劑盒(比色法)Cbz-L-蘇氨芐酯 98%5-溴-1-戊烯 95%

兔子α2抗纖溶(α2-AP)試劑盒 溶血定性試劑盒O-苯-N-叔丁羰-L-酪氨 98%5-溴-4--3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨葡萄糖 99%

兔子α2抗纖溶(α2-AP)試劑盒 溶血定性試劑盒N-叔丁氧羰-L-天冬氨 4-叔丁酯二環(huán)己鹽  98%5-溴-2-糖 98%

兔子纖溶原(Plg)試劑盒 原卟啉試劑盒(微板法)N-叔丁氧羰-D-天冬氨 1-芐酯  BR5-溴-4--3-吲哚磷酯對苯鹽 for molecular biology, ≥

兔子纖溶原(Plg)試劑盒 原卟啉試劑盒(比色法)S-乙酰-N-叔丁氧羰-L-半胱氨  96%苯并(a)蒽 分析標準品

兔骨形成蛋白(BMPs)試劑盒 原卟啉試劑盒(比色法)N-叔丁氧羰-S-[(乙酰氨)]-L-半胱氨 4-酯  98%還原輔Ⅱ四鈉鹽 98%
VEGF血管內皮細胞生長(cháng)因子ELISA試劑盒用途：

常規組織切片HE染色

注意事項：

染色中leagene推薦采用該試劑。無(wú)氧化膜，細胞核染色質(zhì)著(zhù)色深而細微，臨床上常替代Harris染色液，染色時(shí)間一般3-5分鐘。

儲存條件：室溫，12個(gè)月