VEGF-B血管內皮細胞生長(cháng)因子BELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

大鼠白介素4(IL-4)試劑盒咪唑溶液(1mol/L)(S)-2,6-二叔丁氧羰氨己 98%反二 99.5%

大鼠白介素2(IL-2)試劑盒 牛血清白蛋白溶液(1% BSA)叔丁氧羰-L-鳥(niǎo)氨  98%聚烯鈉 average Mw 500萬(wàn)-700萬(wàn) ,80目

大鼠白介素2(IL-2)試劑盒 牛血清白蛋白溶液(5% BSA)BOC-D-苯氨 99%丁二 AR,99.5%

大鼠白介素1α(IL-1α)試劑盒 牛血清白蛋白溶液(10% BSA)N-叔丁氧羰-L-絲氨 97%丁二鈉 AR，99.0%

大鼠白介素1α(IL-1α)試劑盒 緩沖吸收液(100×)BOC-L-蘇氨 98.5%異辛  >99.0%(GC)

大鼠白介素18(IL-18)試劑盒緩沖吸收液(100×)N-苯酰-L-精氨乙酯鹽鹽 98%正壬 GCS, ≥99.5% (GC)

大鼠白介素18(IL-18)試劑盒EDTA洗液(10%)O-芐-L-絲氨 99%正壬 98%

大鼠白介素10(IL-10)試劑盒 草洗液(10%)O-叔丁-L-蘇氨 98%L-上腺素 98%（劇品）

大鼠白介素10(IL-10)試劑盒 磷三鈉洗液(5%)N-苯酰-L-酪氨乙酯 98%L-去上腺素 98%

大鼠胰島素樣生長(cháng)因子2(IGF-2)試劑盒尿素洗液(45%)N-(叔丁氧羰)乙 96%他定側鏈 98%

大鼠胰島素樣生長(cháng)因子2(IGF-2)試劑盒碳鈉洗液(10%)卡特縮合劑 98% 5-芐硫四氮唑 98.5%

大鼠胰島素樣生長(cháng)因子1(IGF-1)試劑盒碳鈉洗液(10%)舒緩激肽三醋鹽  95%5-巰-1-四唑 98%

大鼠胰島素樣生長(cháng)因子1(IGF-1)試劑盒碳鈉洗液(10%)BOC-L-氨 98%氧鹽鹽 98%

大鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒丁鈉溶液(5mol/L)BOC-L-絲氨 97%疊氮鈉 AR,99%（劇品）

大鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒溶液(0.1%,12.5KU,無(wú)菌)S-芐-L-半胱氨 98%四氮唑乙 98%

大鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒 溶液(0.1%,12.5KU,無(wú)菌)Boc-L-天冬氨 4-芐酯  98%油 AR
VEGF-B血管內皮細胞生長(cháng)因子BELISA試劑盒用途：

促藍、藍化、分化液

注意事項：

主要由碳鋰、雙蒸水組成。注意密閉保存。

儲存條件：室溫，12個(gè)月