FEP游離原卟啉ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

假定蛋白LOC677340 試劑盒二氫愈創(chuàng )木脂異酯  97%2,4-二苯  98%

假定蛋白LOC677340 試劑盒二萜酯 98%（劇品）2-巰苯并噁唑 98%

假定蛋白LOC433328 試劑盒二氧馬錢(qián)酯苯酯 98%直接紅80 AR

假定蛋白LOC433328 試劑盒二乙-(+)-松脂酯二 Standard for GC，>99.8%（T)間乙 98%

髓樣分化因子初次應答因88(MYD88)試劑盒二乙長(cháng)葉九里香內酯二酯二 AR,99.5%辛二 99%

髓樣分化因子初次應答因88(MYD88)試劑盒二乙丁香樹(shù)脂酯二 CP,98%2,2,6,6-四哌啶-1-氧 98%

干擾素活化因205(Ifi205)試劑盒二乙松屬素酯二 分析標準品5-氟 99%

干擾素活化因205(Ifi205)試劑盒番石榴二疊氮磷二苯酯  97% 二酰 98%

組織相容性2-K1-K 區(H2-K1)試劑盒反式-異扁柏脂素疊氮三硅烷 93%氟硅銨 CP

組織相容性2-K1-K 區(H2-K1)試劑盒蜂蜜曲菌素3- 98%六氟鈦，水溶液 50%水溶液

白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)試劑盒覆盆子異磺酰酯 98%2-溴間二苯 97%

白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)試劑盒橄欖樹(shù)脂素三聚 99%溴乙芐酯 96%

C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)試劑盒高根二1,3-二氨胍鹽鹽 97%溴乙 CP,98.0%

C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)試劑盒高良姜萜內酯氫鈉 95%溴乙 AR,98.5%(GC)

假定蛋白LOC677168 試劑盒根皮含柘樹(shù)咕噸 D二鈉 96%溴乙 分析標準品

假定蛋白LOC677168 試劑盒根皮含柘樹(shù)咕噸 L氫鈉 1.0 M in THF溴乙 Standard for GC,≥99.5% (GC)
FEP游離原卟啉ELISA試劑盒Rhodamine 123染色液可用于細胞凋亡檢測，Rhodamine 123 是一種細胞通透性的、陽(yáng)離子的熒光探針，容易被有活性的線(xiàn)粒體攝取，沒(méi)有細胞毒性，Rhodamine 123由于帶陽(yáng)離子所以當線(xiàn)粒體膜電位存在的時(shí)候就會(huì )透過(guò)細胞膜在活細胞的線(xiàn)粒體內聚集，發(fā)出黃綠色熒光，而當膜電位下降的時(shí)候，聚集的Rhodamine 123 就減少，從而發(fā)光強度降低。

Rhodamine 123 常與Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等組合進(jìn)行多色熒光分析,相互間無(wú)顏色交叉;分析細胞凋亡時(shí),可用Rhodamine 123 來(lái)檢測線(xiàn)粒體的膜電位,而用NAO 來(lái)檢測線(xiàn)粒體結構的完整性。Rhodamine 123，可用于對許多種細胞進(jìn)行染色，包括植物細胞和細菌。由于細胞內ATP的量與Rhodamine 123的熒光強度之間有相關(guān)性，Rhodamine也可應用于檢測細胞內的ATP。

儲存條件：4℃避光保存。長(cháng)期保存-20℃避光保存。

有效期：六個(gè)月。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。