PIBF孕激素誘導阻斷因子ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒宋果靈3-嗎啉-2-羥磺 99%對叔丁芐硫 97%

水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒多根3-嗎啉-2-羥磺鈉 99%4'-叔丁-4-丁酰苯 98%

水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒苯酰次化硝四氮唑藍 98%L-酪氨乙酯鹽鹽 98%

水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒查斯曼寧化硝四氮唑藍 分子生物學(xué)級乙酰苯 AR,99.0%

類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)試劑盒麗江茚三，水合 AR,95.0%5-芐硫四氮唑 98.5%

類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)試劑盒去茚三，水合 ACS reagent, ≥98.0% (UV)L-上腺素 98%（劇品）

抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒脫氧5-硝 98%稱(chēng)量紙 190mm*250mm，500張/包

抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒乙酰4-氟-7-硝-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 99%檸檬三酯 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒冉4-硝-7-哌苯并氧雜惡二唑 98%2-氨-4，6-二嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒12-表-歐4-肼-7-硝-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 98%2-氨-4，6-二嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒甘露三糖1,4-哌二乙磺 99%4,6-二-2-巰嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒哌-N,N-雙(2-羥烷磺) 99%4,6-二嘧啶 98%

抗小球底膜抗體(GBM)試劑盒隱色孔雀石綠苯磺酰氟 ≥98.5% (GC)N,N′-二苯-N,N′-(3-)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二（TPD）

抗小球底膜抗體(GBM)試劑盒N-荷葉對二苯二聚體 99%浴銅靈  98%

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒去氫荷葉對磷二鈉 98%2-溴芴 97%

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒多巴鹽鹽5’-磷吡哆,一水 98%浴銅靈 purified by sublimation, 99.99% trace metals basis
PIBF孕激素誘導阻斷因子ELISA試劑盒熒光染料Hoechst33342 能少許進(jìn)入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進(jìn)入凋亡細胞中的Hoechst33342 比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 的結構發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33342 排出到細胞外使之在細胞內積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。而PI 染料是不能進(jìn)入細胞膜完整的正常細胞和凋亡細胞中，即活細胞對PI 染料拒染，而壞死細胞由于膜完整性在早期即已破損，可被PI 染料染色。

用Hoechst33342 結合PI 染料對凋亡細胞進(jìn)行雙染色，就可在流式細胞儀上將正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞區別開(kāi)來(lái)。在雙變量流式細胞儀的散點(diǎn)圖上，這三群細胞表現分別為：正常細胞為低藍色/低紅色（Hoechst33342+/PI+），凋亡細胞為高藍色/低紅色（Hoechst33342++/PI+），壞死細胞為低藍色/高紅色（Hoechst33342+/PI++）

儲存：2-8℃，避光，有效期一年。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。