Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )試劑盒1,3,5-三咖啡?？鼘?-溴丁 98%苯偶酰 98%

橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )試劑盒1,3-二咖啡?？鼘?洋薊素二聚環(huán)戊二烯 97%,Endo苯 Standard for GC，≥99.5%（GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)試劑盒1,5-二咖啡?？鼘幎郗h(huán)戊二烯 98%,Endo + Exo苯 AR,>98.5%(GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)試劑盒1,7-二羥-3,4-二氧山-7-O-葡萄糖二聚環(huán)戊二烯 97%,Exo苯 CP,>98%(GC)

25羥維D3(25(OH)D3/25 HVD3)試劑盒1,8-桉葉素橄欖油 CP苯 ACS

25羥維D3(25(OH)D3/25 HVD3)試劑盒1，8-二羥蒽醌橄欖油 藥用級，Ph Eur苯 >99.0% (GC)

白三烯B4(LTB4) 試劑盒10-姜酚亞磷三乙酯 98%苯 重蒸餾, ≥99.5%

白三烯B4(LTB4) 試劑盒10-羥癸烯二茂鐵 98%DL-苦杏仁 CP,98.5%

腸脂肪結合蛋白(iFABP)試劑盒10-羥攀援山橙二茂鐵 99%苯乙 99%

腸脂肪結合蛋白(iFABP)試劑盒10-羥聚（烯酯） SU CP，98.0%（劇品）

大鼠一氧化氮(NO)試劑盒10-羥喜樹(shù)聚苯乙烯(PS) 通用型II,高強度藍V AR

大鼠一氧化氮(NO)試劑盒10-去乙酰紫杉;7-表-去乙酰紫杉聚苯乙烯(PS) 通用型III,高強度、押出用、食品用喹啉黃 70%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 10-脫乙酰巴卡亭聚苯乙烯(PS) 耐沖擊型檸檬二氫 AR,98.0%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 11-O-羅漢果V聚苯乙烯(PS) 高光澤度級香草 AR，99%

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)試劑盒11-羥柳杉酚聚苯乙烯(PS) 擠出級香草 ≥99%, FCC, FG

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)試劑盒11-羰-Β-乙酰乳香聚苯乙烯(PS) 食品級天然香蘭素 Natural，≥99%, FCC, FG
Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA試劑盒BCIP/NBT 堿性磷酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS 鑒定等的試劑盒。

BCIP/NBT 是堿性磷酯酶的常用底物。在堿性磷酯酶的催化下，BCIP 會(huì )被水解產(chǎn)生強反應性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會(huì )和NBT 發(fā)生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結合有堿性磷酯酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酯酶顯色。

組份規格：

試劑A：堿性磷酯酶顯色緩沖液 100ml

試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl

試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl

使用說(shuō)明

1. 對于組織切片或細胞樣品或膜，在與堿性磷酯酶標記的抗體或其它形式的探針?lè )跤?，用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對于檢測內源性堿性磷酯酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。

2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL

3. 后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長(cháng)時(shí)間(可長(cháng)達24 小時(shí))，直至顯色至預期深淺。

5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應。

6. 對于組織切片或細胞樣品，顯色反應終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀(guān)察。對于膜，顯色反應終止后，可以室溫晾干避光保存。

儲存：4℃，有效期一年。