LPS脂多糖/內毒素ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)試劑盒重樓皂VI四苯溴化膦 98%乙烯利 80%

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)試劑盒重樓皂VII四乙氫氧化銨 AR,25%水溶液無(wú)水四化錫 AR

低密度脂蛋白受體(VLDLR)試劑盒豬去氧膽四化銨 98%三苯化錫 96%

低密度脂蛋白受體(VLDLR)試劑盒竹紅菌素四氫氧化銨 1.0 M in H2O乙烯利 80%

低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒竹紅菌素四硫氫銨 99%赤  >90% (HPLC)

低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒竹紅菌乙素四醋銨 90%蒙脫土KSF 蒙脫土KSF ,10 m2/g

高密度脂蛋白(HDL)試劑盒竹節參皂ⅣA四乙氟化銨(二水) 98%N-乙嗎啉 99%

高密度脂蛋白(HDL)試劑盒竹節香附素A三鹽鹽 98%N-乙嗎啉 蛋白測序, ≥99.5% (GC)

αS轉移(α-GST)試劑盒梓四丁氫氧化銨溶液 ～25% in H2O (～0.8 M)N-酰嗎啉 99%

αS轉移(α-GST)試劑盒梓酚四丁氫氧化銨溶液 10% in H2ON-嗎啉 CP，98%

同型半胱氨(Hcy)試劑盒紫草呋喃A四正丁氟化銨 1M THF溶液N-嗎啉 GR，99%

同型半胱氨(Hcy)試劑盒紫草四正丁氟化銨 75% 水溶液二硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)

游離脂肪(FFA)試劑盒紫草素四正辛 98%  二硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)

游離脂肪(FFA)試劑盒紫草苯三三 97%二硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)

骨粘連蛋白(ON)試劑盒紫（五加B）三苯膦氫鹽 97%1-萘酚 AR，99.0%

骨粘連蛋白(ON)試劑盒紫花前胡苯三化銨 98%萘 99.6%
LPS脂多糖/內毒素ELISA試劑盒瑞氏染液主要應用于血液和骨髓涂片染色。

操作步驟

1. (選做)平置血涂片于染色架上，滴加甲醇固定液，室溫固定15-30 分鐘。

2. 吸去固定液，室溫通風(fēng)晾干。

3. 將試劑一滴加到載玻片上，均勻覆蓋住載片上血細胞，染色時(shí)間約為1 分鐘。等染液有變紅的趨勢時(shí)，迅速滴加兩倍試劑一的量的試劑二。繼續染色5 到8 分鐘。

4. 小股水流洗片，防止將大量的細胞從載片上沖落下來(lái)從而影響以后的觀(guān)察。30s 水洗結束后將載片放到陰涼處風(fēng)干。

5. 顯微鏡鏡檢。

染色結果

1. 紅細胞呈淺紅色，中央稍淡而略有蝶形態(tài)。

2. 白細胞系統清晰易分，細胞膜清晰呈紫黑色，細胞核著(zhù)色呈深淺不同的紫紅色，胞漿中各種顆粒區分明顯。其中中性粒細胞漿中顆粒呈淡紫紅色，嗜粒細胞漿中顆粒呈桔紅色、嗜堿性粒細胞胞漿中顆粒呈藍褐色。單核細胞的胞漿呈灰藍色，胞漿中顆粒呈細小淡紫紅色或藍紫色。淋巴細胞胞漿呈淡藍色。

注意事項

1. 推片：取全血3 微升左右置載玻片上，將推玻片保持與載玻片30 度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見(jiàn)血液沿推片下緣散開(kāi)，再勻速沿載玻片平面向前滑動(dòng)，至血液鋪完血膜為止。

2. 涂片時(shí)不要太厚也不要太薄，太厚紅細胞重疊并易皺，太薄時(shí)不易找到白細胞。

3. 用蠟筆在血膜兩頭劃線(xiàn)，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)血膜易脫落。

4. 試劑一及二染液不能過(guò)少，以防很快蒸發(fā)引起染液沉淀。試劑一不可少于400 微升，試劑二是試劑一的1 倍量。滴加試劑一及二時(shí)要輕搖玻片或用洗耳球對準血片吹氣，使染液充分混合。

5. 鏡檢時(shí)如果紅細胞偏藍，請放在蒸餾水中1-3 分鐘，直至紅潤為止。

6. 染色過(guò)淡，可復染。染色過(guò)深，可用水沖洗或浸泡，還可用75%乙醇脫色3-5 秒。

儲存：2～8℃，避光，有效期12個(gè)月。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。