eIF3a真核翻譯起始因子3aELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

尿激(UK)試劑盒 L-亮氨（白氨）D-蛋氨 99%霉酚嗎啉乙酯 分析標準品，≥98%

尿激(UK)試劑盒 L-鳥(niǎo)氨鹽鹽L-正纈氨 99%新 分析標準品，≥97%

磷烯式羧激(PCK)試劑盒L-蘋(píng)果L-正亮氨 99%新芒果 分析標準品，≥98%

磷烯式羧激(PCK)試劑盒L-羥脯氨D-鳥(niǎo)氨鹽鹽 99%蕓香柚皮 分析標準品，≥98%

胰蛋白(trypsin)試劑盒 L-乳L(cháng)-鳥(niǎo)氨鹽鹽 98%補骨脂素  分析標準品，≥98%

胰蛋白(trypsin)試劑盒 L-色氨L-苯氨叔丁酯鹽鹽 99%補骨脂素  98%

β位淀粉樣前體蛋白裂解1（BACE1）試劑盒L-鼠李糖DL-苯氨 >98.0%(HPLC)枸橘 分析標準品，≥98%

β位淀粉樣前體蛋白裂解1（BACE1）試劑盒L-絲氨L-苯氨酯鹽鹽 98%苦鬼臼素 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構前體(PDI)試劑盒L-蘇氨D-苯氨 98%原 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構前體(PDI)試劑盒L-天冬氨D-脯氨 99%槲皮 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構A3(PDIA3)試劑盒L-天冬酰D-絲氨酯鹽鹽 98%金絲桃 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構A3(PDIA3)試劑盒L-纈氨D-絲氨 98.5%槲皮素 分析標準品，≥98.5%

山梨脫氫(SDH)試劑盒L-異亮氨DL-絲氨 98%槲皮素 97%

山梨脫氫(SDH)試劑盒L-組氨L-絲氨酯鹽鹽 98%吳茱萸次 分析標準品，≥98%

肽脯氨酰順?lè )串悩?/span>(PPI)試劑盒L-組氨鹽鹽D-蘇氨 99%吳茱萸次 98%

肽脯氨酰順?lè )串悩?/span>(PPI)試劑盒MilataxelD-色氨酯鹽鹽 98%迷迭香 分析標準品，≥97%
eIF3a真核翻譯起始因子3aELISA試劑盒分子量：651.01

外觀(guān)：淡黃色粉末

溶劑：水或者DMSO

光學(xué)特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm.

儲存：-20℃，避光，有效期兩年。

Hoechst 系列染料是一類(lèi)可用于應用于熒光顯微鏡和流式細胞術(shù)分析的標記DNA 的熒光家族染料。因其可以標記DNA，所以這類(lèi)染料被廣泛的應用于細胞核和線(xiàn)粒體的可視化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作為類(lèi)二苯甲亞胺的染料，是其中廣泛應用的核染料。這兩種染料都可以被350nm 左右的紫外光激發(fā)，發(fā)射461nm 左右的藍紫色熒光。Hoechst 染料可以用于固定或者活細胞染色，也通常被用于另一種核染料的替代物，DAPI。他們之間重要的區別在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有親脂性，因此更易于穿過(guò)細胞膜。在一些應用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表現出較差的膜透性。這類(lèi)染料也常被用于檢測樣本DNA 的含量，只需要設置一個(gè)熒光強度-DNA 含量之間的標準曲線(xiàn)即可。

本產(chǎn)品是一種長(cháng)波的核黃染料，通用和退行性示蹤標志染料真藍做神經(jīng)元的雙色標記。在神經(jīng)元細胞中，核黃優(yōu)先染色細胞核為黃色熒光，而真藍作為一種紫外激發(fā)光激發(fā)的二價(jià)陽(yáng)離子染料可以染色細胞質(zhì)為藍色熒光。兩種染料在免疫組織化學(xué)應用中的表現都非常穩定，可以用于和DAB 染料的聯(lián)合應用。當Hoechst33258、Hoechst33342 和核黃通過(guò)軸突逆行運輸到母細胞體后，可能會(huì )遷出軸突和母細胞體，因此可以作為毗鄰神經(jīng)膠質(zhì)細胞細胞核的熒光染料。這種遷出現象在體內和體外的研究中，當您將切片保存于水性環(huán)境下，都有發(fā)現。使用1%示蹤劑時(shí)，活體內的遷出現象可以通過(guò)限制動(dòng)物的生存時(shí)間而加以控制。體外的遷出現象可以通過(guò)材料組織的快速處理來(lái)避免。