CSPP1中心體紡錘體極相關(guān)蛋白1ELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

5羥色(5-HT)試劑盒小豆蔻明硫代硫銨 99%7-吲哚 98%

5羥色(5-HT)試劑盒小蕓木素硫代硫銨 98%4-吲哚 98%

抑制素A(INH-A)試劑盒纈草3-酚 98%N-間苯 97%

抑制素A(INH-A)試劑盒纈草三酯3-酚 分析標準品1-吡唑 98%

性激素結合球蛋白(SHBG)試劑盒性鉻藍K AR(S)-(+)-扁桃酯 98%

性激素結合球蛋白(SHBG)試劑盒辛弗林偶氮熒光桃紅 Biological stain(R)-(-)-扁桃酯 98%

脫氫表雄S7(DHEA-S7)試劑盒辛弗林鹽鹽偶氮熒光桃紅 Dye content 90 %2-烯 ≥99.5%

脫氫表雄S7(DHEA-S7)試劑盒辛辣內酯A鹽氨脲 99%5-酰水楊酯 98%

脫氫表雄(DHEA)試劑盒辛夷脂素鹽氨脲 分析標準品，99.95%2- 98%

脫氫表雄(DHEA)試劑盒新補骨脂異黃1-氨-2-萘酚-4-磺 97%5-硝吲哚 98%

降鈣素因相關(guān)肽(CGRP)試劑盒新茜素絡(luò )合指示劑 IndicatorDL-α-氨 98%

降鈣素因相關(guān)肽(CGRP)試劑盒新二氫查爾茜素 97%R-(-)-1,2- 99%

(SS)試劑盒新內酯苯藍，溶 Biological stain(S)-(+)-1,2- 98%

(SS)試劑盒新對葉百部茜素綠 AR2-苯異丁 98%

生長(cháng)激素釋放多肽(GHRP) 試劑盒新苦味素苯藍（溶） BS IND4-吡啶乙鹽鹽 98%

生長(cháng)激素釋放多肽(GHRP) 試劑盒新魯斯可皂元偶氮胭脂紅G Biological stain4-(1-吡咯烷)苯 97%
CSPP1中心體紡錘體極相關(guān)蛋白1ELISA試劑盒本探針是常用的細胞膜熒光探針之一，呈現橙紅色熒光。DiI是一種親脂性膜染料，進(jìn)入細胞膜后可以側向擴散逐漸使整個(gè)細胞的細胞膜被染色。DiI在進(jìn)入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進(jìn)入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，DiI和磷酯雙層膜結合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，大激發(fā)波長(cháng)為549nm，大發(fā)射波長(cháng)為565nm。

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

CAS：41085-99-8。

DiI可以溶解于無(wú)水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現較難溶解時(shí)可以適當加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。

DiI被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長(cháng)期示蹤劑。DiI通常不會(huì )影響細胞的生存力。被DiI標記的神經(jīng)細胞在體外培養的條件下可以存活長(cháng)達4周，在體內可以長(cháng)達一年。DiI在經(jīng)過(guò)固定的神經(jīng)元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經(jīng)元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。

DiI除了簡(jiǎn)單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過(guò)程中細胞遷移，通過(guò)FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

用于細胞膜熒光標記時(shí)，DiI的常用濃度為1-25μM，常用的濃度為5-10μM。DiI可以直接染色活的細胞或組織，染色時(shí)間通常為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚進(jìn)行固定，使用其它不適當的固定液會(huì )導致熒光背景較高。

注意事項：熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

儲存條件：4℃避光，有效期一年。