TNFα腫瘤壞死因子αELISA試劑盒

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)試劑盒水甘草硒粉 99.9% metals basis,200目氟化釔 powder, 99.99% metals basis

鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)試劑盒水合氧化前胡素硒粉 ≥99.99% metals basis,200目氟化鐿 99.99% metals basis

阿米巴(Amebiasis)試劑盒水黃皮素硒粉 ≥99.999% metals basis，-100mesh，powder硫鐿,八水 99.9% REO

阿米巴(Amebiasis)試劑盒水晶蘭硒 ≥99.9999% metals basis,Powder硫釔(III),八水 99.9% metals basis

白喉抗體(Diphtheria Ab)試劑盒水蘇硒 99.999% metals basis，1-6MM particle size 乙 98%

白喉抗體(Diphtheria Ab)試劑盒水蘇糖硒 ≥99.9999% metals basis,Powder,不規則顆粒三聚 99%

囊蟲(chóng)病抗體(CYT Ab)試劑盒水仙* 99.99% metals basis,薄片二二酯 98%

囊蟲(chóng)病抗體(CYT Ab)試劑盒水仙環(huán)素二氧化碲 99.99% metals basis二二乙酯 99%

布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)試劑盒水楊二氧化碲 99.999% metals basis二二異酯 99%

布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)試劑盒水楊碲粉   粉末,99.99% metals basis,100目乙二四乙鐵鈉  13.5-18.5% Fe basis

水痘帶狀皰疹病IgM(VZV-IgM)試劑盒水楊酯碲  粒狀，2-3cm,99.999% metals basis乙乙酯 99%

水痘帶狀皰疹病IgM(VZV-IgM)試劑盒絲石竹皂元3-O-B-D葡萄糖酯碲 7N乙二四乙四鈉 AR,99.0-102.0% (T)

水痘帶狀皰疹病IgG(VZV-IgG)試劑盒斯皮諾素高純錫 99.999% metals basis，1-6mm，顆粒亞氨二乙 95%

水痘帶狀皰疹病IgG(VZV-IgG)試劑盒四姜黃素錫 99.9999%乙酯 99%

軍團菌抗體IgA(LP Ab-IgA)試劑盒四氫表小檗碲化鋅 99.99% metals basis苯乙 99%

軍團菌抗體IgA(LP Ab-IgA)試劑盒四氫非洲防己碲化鋅 99.999% metals basis，塊狀，1-6mm AR，99.0%（劇品）
TNFα腫瘤壞死因子αELISA試劑盒本產(chǎn)品以焦油紫作為核心染料，焦油紫具有感光作用，能夠很好地顯示尼氏體的變化。尼氏體的存在和消失是神經(jīng)細胞是否受損的重要指標，當發(fā)生腦炎、腦缺血、軸突反應等情況，尼氏體會(huì )發(fā)生溶解，甚至消失?？梢杂糜谑灲M織切片的尼氏物質(zhì)、神經(jīng)元等的染色。

神經(jīng)元細胞體包括一個(gè)具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質(zhì)和一個(gè)明顯的核仁。在細胞體中細胞質(zhì)是尼氏顆粒，即能夠代表粗面內質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點(diǎn)狀嗜堿性顆粒。尼氏顆?？梢杂煤芏嗳旧珌?lái)顯示如中性紅、亞甲基藍、甲藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時(shí)間使一些染色既可以?xún)H突出尼氏物質(zhì)，也可以顯示神經(jīng)元的細胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。尼氏體(Nissl body)或稱(chēng)尼氏小體是分布于神經(jīng)細胞胞質(zhì)內的三角形或橢圓形小塊狀物質(zhì)，能被堿性染料如硫堇、甲藍和焦油紫等染料染成藍紫色。各種神經(jīng)細胞內斗含有尼氏體，但其形狀、數量、分布位置常常不同。尼氏體會(huì )因生理狀態(tài)的變化而變化，是神經(jīng)元內合成蛋白質(zhì)的重要部位，當神經(jīng)元受到刺激后，包體內的尼氏體會(huì )明顯減少。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期半年。