TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

腸病(Enterovirus)試劑盒升麻素氧鹽鹽 98%四鄰苯二酐 98%

腸病(Enterovirus)試劑盒升麻素甜菜,無(wú)水 98%乙酰溴 97%

包蟲(chóng)抗體IgG 試劑盒升麻-3-O-α-L-拉伯糖甜菜,一水 99%溴代炔 99%

包蟲(chóng)抗體IgG 試劑盒圣草次甜菜鹽鹽 分析標準品，99.5%三溴化磷 ≥99.99% metals basis

百日咳素(PT)試劑盒圣草酚乙酰鈹 97%三溴化磷 99%

百日咳素(PT)試劑盒十七碳酯乙酰鈷（II） 97%三溴化磷 CP,98.0%

白色念珠菌(C.albicans)試劑盒乙酰銅 97%三溴 AR,98%

白色念珠菌(C.albicans)試劑盒石斛酚乙酰鎘 98%二 98%

流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)試劑盒石斛乙酰鉿 97% 99%

流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)試劑盒石榴皮鞣素乙酰鐵 98% ≥99.5%

(Coronaviruses IgG)試劑盒石杉乙酰錳 97% Standard for GC,>99.5%

(Coronaviruses IgG)試劑盒石杉乙乙酰鎳 95% 分析標準品，≥99.7% (GC)

不耐熱腸素B亞單位(LTB)試劑盒 石松靈乙酰鉑(II) 97%醋酯 99%

不耐熱腸素B亞單位(LTB)試劑盒 石蒜乙酰氧釩 99%Amberlyst® 15離子交換樹(shù)脂 濕

沙眼衣原體抗體(CT)試劑盒石蒜裂乙酰鋅 97%Amberlyst® 15離子交換樹(shù)脂 干

沙眼衣原體抗體(CT)試劑盒矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖銻粒 99.9999% metals basisAmberlite® IRA-900 陰離子交換樹(shù)脂
TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒Masson三色染色又稱(chēng)馬松染色，是結締組織染色中經(jīng)典的一種方法，是膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。所謂三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)：分子的大小由分子量來(lái)體現，小分子量易穿透結構致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進(jìn)入結構疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或藍的分子量都很大，因此Masson染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色(淡綠)或藍色(藍)，主要用于區分膠原纖維和肌纖維。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

染色穩定。

分化時(shí)間短，一般僅需1～2秒。

色彩清晰鮮艷。

適用范圍廣，適宜于組織的石蠟切片、冰凍切片等染色。

所染切片保存時(shí)間長(cháng)且不易褪色。