TGFBR3轉化生長(cháng)因子β受體3ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

金屬硫蛋白(MT)試劑盒灰氈毛忍冬皂乙四丁氫氧化銨 ~40% 水溶液，離子色譜級2--1,3-二化咪唑鎓 90%

金屬硫蛋白(MT)試劑盒茴芹內酯2,4,5-三 分析標準品代二哌啶碳鎓六氟磷鹽 98%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)試劑盒茴香腦叔戊 97%代三吡咯烷鏻六氟磷鹽 98%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)試劑盒肌氨DL-α-酚琥珀酯 分析標準品多肽試劑TCTU 98%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒肌三氧鎓四氟鹽 96%2--1,3-二咪唑六氟磷鹽 98%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒(三硅烷)重氮 2.0M 己烷溶液3-(二乙氧磷酰氧)-1,2,3-苯并三-4- 98%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒雞屎藤三(2-氨乙) 97%代磷二乙酯 純度 ≥90%

小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒雞屎藤酯2-硫脲嘧啶 分析標準品2-(2-吡啶-1-)-1,1,3,3-四脲四氟鹽  99%

黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)試劑盒雞屎藤四己硫氫銨 用于離子色譜, ≥99.0% (T)N,N'-二環(huán)己碳二亞 99.0%

黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)試劑盒積雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亞碳酯 98%

高分子量角蛋白(CK-HMW)試劑盒積雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 97%4-二氨吡啶 99%

高分子量角蛋白(CK-HMW)試劑盒吉馬替康2,4,5-三苯 分析標準品,99%4,4'-二氧三苯 98%

肝癌抗原(PHC)試劑盒吉馬1,2,3,4-四苯 分析標準品,98%4,5-二咪唑 98%

肝癌抗原(PHC)試劑盒吉妥辛5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二咪唑 99%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)試劑盒 三溶液 50%溶液二吡咯烷(N-琥珀酰亞氨氧)碳六氟磷鹽  98%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)試劑盒 加蘭他敏二十三烷 分析標準品,99.5%4-(4,6-二氧三)-4-嗎啉鹽鹽 97%
TGFBR3轉化生長(cháng)因子β受體3ELISA試劑盒熒光染料CFSE(CFDA-SE)，是一種可對活細胞進(jìn)行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞。CFSE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結合細胞內的蛋白質(zhì)。CFSE在結構上將酚羥基部位改造成AM 體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，在活細胞內與胞內蛋白共價(jià)結合，進(jìn)入細胞內的CFSE的AM 部位能被細胞內酯酶水解發(fā)出綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內蛋白質(zhì)的氨基部位結合，固定在細胞內，不會(huì )漏出細胞外。CFSE 進(jìn)入細胞后定位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核，在細胞核的熒光強。

在細胞分裂增殖過(guò)程中，CFSE的熒光強度會(huì )隨著(zhù)細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。CFSE標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過(guò)程中，CFSE標記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過(guò)流式細胞儀(FL1 通道)根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。CFSE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經(jīng)CFSE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會(huì )使鄰近細胞染色的功能。

CFSE標記的細胞用于體內觀(guān)察可以長(cháng)達數周之久，它常被用來(lái)做活體細胞檢測實(shí)驗和用熒光電鏡觀(guān)察細胞長(cháng)期活動(dòng)的實(shí)驗。CFSE 毒性小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準確和更安全地得到想要的實(shí)驗數據。

CFSE標記細胞后通常用流式細胞儀進(jìn)行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK 細胞等其它細胞的增殖檢測。

CFSE標記細胞呈綠色熒光，熒光波長(cháng)：λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測時(shí)的激發(fā)波長(cháng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(cháng)為516nm，使用流式細胞儀檢測時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFSE標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細胞示蹤觀(guān)察。

儲存條件：CFSE須-20℃避光保存，注意防潮。

有效期：六個(gè)月。