TGFβ2轉化生長(cháng)因子β2ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

周期素D2(Cyclin-D2)ELISA 金剛烷1-三硅烷-1-己炔 98%N,N,N',N'-四-O-(N-琥珀亞)脲六氟磷鹽  98% 好

周期素D2(Cyclin-D2)ELISA 金合歡素三乙3--4-膦酰-2- 80%三(N,N-四亞)磷酰 98%

周期素D1(Cyclin-D1)試劑盒金雀花四氫對苯醌 Indicator1-對苯磺酰-3-硝-1,2,4-三唑  98%

周期素D1(Cyclin-D1)試劑盒金色酰酯三（4 -氧- 3 ,5 -二苯）膦 500mg1-對磺酰咪唑 99%

內皮抑素(ES)試劑盒金石蠶2-三硅乙炔噻吩 97%O-(N-琥珀酰亞)-N N N'N'-四四氟脲  97%

內皮抑素(ES)試劑盒金絲桃四硫氫銨 離子對色譜級，≥99.0% (T)2,4,6-三吡啶三  99%

鐵蛋白(FE)試劑盒金絲桃素（±）-α-煙酚三(2-羧乙)膦鹽鹽 98%

鐵蛋白(FE)試劑盒金松雙黃化銩(III) 無(wú)水 粉末,99.9% metals basis疊氮三硅烷 93%

微量轉鐵蛋白(MTF)試劑盒筋骨草甾C尿-5′-二磷鈉鹽 98%O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四脲四氟酯 98%

微量轉鐵蛋白(MTF)試劑盒京尼平溴乙烯 1.0 M THF溶液2,4,6-三異苯磺酰 97%

質(zhì)金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)試劑盒京尼平乙烯溴化鎂 1.0M in THFN,N,N′,N′-四脒六氟磷鹽 99%

質(zhì)金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)試劑盒京尼平龍膽雙糖維B6 分析標準品N,N,N',N'-四-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯并三-3-)脲四

髓鞘性蛋白抗體(MBP)試劑盒九里香纈草烯 98%N,N,N',N'-四脒六氟磷鹽 98%

髓鞘性蛋白抗體(MBP)試劑盒D-D-纈氨酰-L-亮氨酰-L-賴(lài)氨酰-對- 98%伍德沃德氏試劑K 98%

組織多肽抗原(TPA)試劑盒長(cháng)春瑞濱3-環(huán)氧乙-7-氧雜二環(huán)[4,1,0]庚烷 96%魏因勒卜鏈接劑 98%

組織多肽抗原(TPA)試劑盒長(cháng)春質(zhì)木糖 分析標準品印刷標簽,用于25G(ML)及以下包裝,尺寸: 94mm*28mm
TGFβ2轉化生長(cháng)因子β2ELISA試劑盒細胞周期(cell cycle)是指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動(dòng)過(guò)程，通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期組成。G1 期：細胞開(kāi)始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S 期：DNA 開(kāi)始合成，這時(shí)細胞核內DNA的含量介于G1 期和G2 期之間。當DNA 復制結束成為4倍體時(shí)，細胞進(jìn)入G2 期。G2 期的細胞繼續合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進(jìn)入M 期。因此，單純從DNA含量無(wú)法區分G2 期和M 期。一旦有絲分裂發(fā)生，細胞分裂成兩個(gè)細胞，這兩個(gè)細胞或者進(jìn)入下一個(gè)細胞周期，或者進(jìn)入靜止期(G0期)，而G0 期從DNA含量上同樣無(wú)法與G1 期區分。因此，整個(gè)復制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M 期。通過(guò)核染料PI標記DNA,并由流式細胞儀進(jìn)行分析，可以得到細胞各個(gè)時(shí)期的分布狀態(tài)，計算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S 期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標。

PI 為插入性核熒光染料，能選擇性的嵌入核DNA和RNA 雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個(gè)期的百分含量。PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M 期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA 復制的S 期細胞的熒光強度為1-2 之間。

細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內DNA 能夠和熒光染料結合的特性，細胞各個(gè)時(shí)期其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來(lái)檢測細胞周期。

儲存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。