EBTr （NBL-4）細胞

產(chǎn)品名稱(chēng)：牛胚氣管細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：EBTr (NBL-4)細胞

貨號：LZ-X969414
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

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凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)cis-紫莖女貞苷B;cis-Lig沙氏葡萄糖肉湯SabouraudDextroseBroth脂聯(lián)素受體-2抗體

創(chuàng )傷弧菌紫莖女貞苷D;Ligupurpuros結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂VioletRedBileGlucoseAgar脂聯(lián)素抗體

嗜酸乳桿菌紫莖女貞苷C;Ligupurpurosi結晶紫中性紅膽鹽瓊脂含葡萄糖和乳糖VioletRedBileAgarwithGlucoseandLactose腎上腺髓質(zhì)素抗體

嗜酸乳桿菌紫莖女貞苷B;Ligupurpurosi腸道菌增菌肉湯EE肉湯EnterobacteriaEnrichmentBrothMossel腎上腺髓質(zhì)素受體抗體

Oleispiraantarctica紫莖女貞苷A;Ligupurpuros甘露瓊脂MannitolSaltAgar活性依賴(lài)的神經(jīng)保護肽抗體

Sphingomonaspituitosa左旋肉堿;L(-)-Carnitine兔血漿檸檬酸鈉RabbitPlasma腺苷受體A3

Sphingomonastrueperi澤瀉B;AlisolB連四硫酸鹽肉湯培養基基礎FluidTetrathionateMediumBasealpha-1腎上腺素能受體抗體

彎曲乳桿菌澤瀉A;AlisolA溶液alpha-2腎上腺素能受體抗體

產(chǎn)酸克雷伯氏菌正丁;Butylamine0.1%煌綠溶液腎上腺素能受體β1抗體

小孢囊桿菌紫檀芪;Pterostilbene亮綠瓊脂培養基BrilliantGreen-AgarMedium腎上腺素能受體β2抗體

大孢珊瑚球菌竹節參皂苷IVa;Chikusetsu木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽瓊脂XyloselysineDesoxycholateAgar腎上腺素能受體β3抗體

葉柄粘球菌梓酚;CatalponolHE瓊脂培養基HektoenEntericAgarMedium陰離子交換蛋白3抗體

紫色孢囊桿菌蔗糖;Sucrose三糖鐵瓊脂培養基TripleSugar-Iron-AgarMedium脂肪增強結合蛋白1

珊瑚狀珊瑚球菌正丁基苯酞;3-n-Butylphath麥康凱瓊脂MacConkeyAgar鼠抗人甲胎蛋白抗體

希瓦氏菌知母皂苷B;Anemarsaponin麥康凱肉湯MacConkeyBroth晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體
EBTr (NBL-4)細胞突觸后密度蛋白93抗體紫錐菊標準品試劑盒 ECHINACEA COMPLETE STANDARDS KIT(P) (AHP Verified)Human, Mouse, Rat

磷化突觸后密度蛋白93抗體紫錐菊標準品試劑盒 ECHINACEA COMPLETE STANDARDS KIT(P) (AHP Verified)Human

磷化突觸后密度蛋白95抗體吳茱萸標準品試劑盒 EVODIA STANDARDS KIT(SH)Human

磷化腫瘤抑制因PTEN抗體吳茱萸標準品試劑盒 EVODIA STANDARDS KIT(SH)Human, Mouse, Rat

磷化腫瘤抑制因PTEN抗體羊藿標準品試劑盒 EPIMEDIUM STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

樁蛋白Paxillin抗體羊藿標準品試劑盒 EPIMEDIUM STANDARDS KIT(P)Human, Mouse, Rat

磷化樁蛋白Paxillin抗體OMEGA 3脂肪標準品試劑盒 OMEGA 3 FATTY ACID STANDARDS KIT(SG)Human, Mouse, Rat

絲氨/蘇氨激酶蛋白Pim1抗體紫錐花異丁酰標準品試劑盒 ECHINACEA ISOBUTYLAMIDE STANDARDS KIT(SH)Human, Mouse, Rat

磷化前病整合位點(diǎn)蛋白1抗體紫錐花異丁酰標準品試劑盒 ECHINACEA ISOBUTYLAMIDE STANDARDS KIT(SH)Human, Mouse, Rat