PIEC細胞

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱(chēng)：豬髖動(dòng)脈內皮細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：PIEC細胞

貨號：LZ-X969447
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

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凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

停乳鏈球菌三聚;Melamine多粘菌素B溶液支架蛋白抗體

豬霍亂沙門(mén)氏菌豬霍亂亞種鼠李糖;L-Rhamnosemonoh培養基胰島素受體底物p53蛋白抗體

痤瘡酸桿菌水晶蘭苷;monotropein甘露卵黃多粘菌素瓊脂平板MYP胰島素受體底物-1抗體

粘質(zhì)沙雷氏菌;Strychnine營(yíng)養瓊脂NA胰島素受體底物-2抗體

大腸桿菌山姜素;Alpinetin營(yíng)養瓊脂平板NA胰島素受體底物-3抗體

金針菇D-松;D-Pinitol胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎胰島素受體底物-4抗體

立枯多核菌桑皮苷A;mulberrosideA胰酪胨大豆多粘菌素肉湯添加劑胰島素受體抗體

普雷恩毛霉麝香酮;3-Methylcyclopen革蘭氏染色液胰島素受體-β抗體

雅致放射毛霉＝葡匐放射毛霉天然;Borneol酚紅葡萄糖肉湯整合素α4抗體

嗜酸乳桿菌2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O無(wú)菌L-酪氨酸懸液粘附分子整合素β1抗體

短雙歧桿菌石吊蘭素;Lysionotin溶菌酶營(yíng)養肉湯基礎粘附分子整合素α5抗體

嬰兒雙歧桿菌射干苷元;tectorigenin培養基整合素-β3抗體

普通變形桿菌射干苷;tectoridin溶菌酶2000萬(wàn)IU/gc-Jun氨基末端激酶1/3抗體

熒光假單胞菌傘形花內酯;7-Hydroxycouma0.1%溶菌酶溶液ATP敏感性通道蛋白抗體

熱帶靈芝水飛薊賓;Silibinin硝酸鹽肉湯Ki-67Antigen抗體
PIEC細胞外周蛋白2抗體2,4-二氨-6-苯-7-蝶啶 4-Nitropyrene

區帶蛋白PZP抗體2-(R)-[1-(R)-(3,5-二(三氟)苯... 2-Aminofluorene

蛋白香葉烯轉移酶1β（FTβ）抗體2-[(2,6-二)氨]苯 2-Amino-9-fluorenone

原鈣粘蛋白15抗體2-（巰）腺苷 5'-三磷四鈉鹽水合物 2-Amino-9,9-dimethylfluorene

原鈣粘蛋白β2抗體2-氨-5,6-二-3(4H)-喹唑啉醋(阿那格... 9-Bromofluorene

原鈣粘蛋白β4抗體2-氨-6,8-二羥嘌呤鹽鹽 2-Bromofluorene

原鈣粘蛋白γ10抗體2-氨-6-羥-8-巰嘌呤 2-Bromo-9-fluorenone

原鈣粘蛋白γA4抗體2-氨-6-巰嘌呤-9-D-核苷水合物 2-Bromo-9,9-dimethylfluorene

原鈣粘蛋白γA2抗體2-氨腺苷 2,7-Diaminofluorene