BSCS-1細胞

產(chǎn)品名稱(chēng)：非洲綠猴腎細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：BSCS-1細胞

貨號：LZ-X969515
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

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凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
ASTE1蛋白抗體?？窠?jīng)素（35肽）組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）測試盒2216E瓊脂

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體重組乙肝病核心抗原酸性蛋白酶測試盒腸球菌瓊脂(膽鹽－七葉苷－疊氮鈉瓊脂)

微絲相關(guān)蛋白1抗體重組乙肝病e抗原中性蛋白酶測試盒BDS培養基

腺苷A1A受體抗體重組人登革熱病2型診斷抗原堿性蛋白酶測試盒葡萄糖瓊脂

芳基硫酸酯酶B抗體重組豬水腫素蛋白胃蛋白酶測試盒Andrade氏糖類(lèi)肉湯

γ氨基丁酸轉氨酶抗體腎上腺髓質(zhì)素（22-52）乙酰輔酶A羧化酶測試盒Korser氏枸椽酸鹽肉湯

共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體腎上腺髓質(zhì)素（22-42）α-淀粉酶測試盒Endo 培養基

腫瘤壞死因子α轉換酶α-1抗胰蛋白酶(抗原）β-淀粉酶測試盒緩沖MUG瓊脂

芳香烴受體核轉錄蛋白2抗體血管緊張素1轉換酶抑制劑(抗原）淀粉分支酶（SBE）測試盒乳糖莫能霉素葡萄糖酸瓊脂

AlkB同源蛋白8抗體ACINUS 多肽抗原酸性轉化酶（AI）測試盒茜素-β-半乳糖苷瓊脂

ABI基因家族成員3結合蛋白抗體小鼠IgA中性轉化酶（NI）測試盒Tergitol-7 瓊脂

Rho GTP酶激活蛋白20抗體促腎上腺皮質(zhì)激素（7-23）(抗原）海藻糖酶測試盒TTC 溶液(0.125%)

含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體肌動(dòng)蛋白(抗原）還原糖含量測試盒標準I號營(yíng)養瓊脂

乙脫氫酶1蛋白家族L1抗體人血清白蛋白標記生物素纖維素酶（CL）測試盒標準II號營(yíng)養瓊脂

軸抑制蛋白2抗體粒-巨噬集落激因子3抗原β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）測試盒A1 培養基
BSCS-1細胞小鼠β氨己糖苷酶A紫花杜鵑（標準品）Human

人素相關(guān)蛋白A紫花前胡苷（標準品）Human

大鼠磷脂酶A2紫花前胡苷元Human

小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A紫花前胡素Human

小鼠克拉拉蛋白紫金蓮（標準品）Human

大鼠組織因子途徑抑制物紫金龍（標準品）Human

人胃抑素紫蓳靈（標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠β半乳糖苷酶紫荊皮（標準品）Human, Mouse, Rat

大鼠水通道蛋白5紫萁（標準品）Human, Mouse