HCA-piC細胞

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產(chǎn)品名稱(chēng)：角膜上皮細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：HCA-piC細胞

貨號：LZ-X969970
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

魯哥氏染色液(Lugol's液,5%)Daidzein；大豆苷元甲基化組蛋白H3-K9染色質(zhì)免疫沉淀分析（CHIP）試劑盒

D'Autoni液Daidzein；大豆苷元甲戊二羥酸激酶（mevalonate kinase）活性比色法定量檢測試劑盒

新型隱球菌染色液Daidzin；大豆苷離子（K）濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

芽孢染色液Daidzin；大豆苷堿性焦磷酸酶（Alkaline Pyrophosphatase）活性比色法定量檢測試劑盒

芽孢染色液Daidzin；大豆苷堿性磷酸酶活性比色法定量檢測試劑盒

莢膜染色液Daminozide；  堿性磷酸酶活性染色試劑盒

莢膜染色液Daminozide；  膠原蛋白（collagen）比色法定量檢測試劑盒

鞭毛染色液(改良Ryu法)Danshensu；丹參素結構型內皮一氧化氮合成酶（cNOS/NOS3/eNOS）活性比色法定量檢測試劑盒

鞭毛染色液(改良Ryu法)Danshensu；丹參素結構型內皮一氧化氮合成酶（cNOS/NOS3/eNOS）活性熒光定量檢測試劑盒

抗酸染色液(Ziehl-Neelsen熱染法)Danshensu；丹參素結構型神經(jīng)元一氧化氮合成酶（cNOS/NOS1/nNOS）活性比色法定量檢測試劑盒

抗酸染色液(Ziehl-Neelsen熱染法)Dansyl chloride；丹磺酰氯結構型神經(jīng)元一氧化氮合成酶（cNOS/NOS1/nNOS）活性熒光定量檢測試劑盒

抗酸染色液(Kinyoun冷染法)Dansyl chloride；丹磺酰氯結合（酯化）膽固酶連續循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

抗酸染色液(Kinyoun冷染法)Danthron；1,8-二羥基蒽醌 結合（酯化）膽固酶連續循環(huán)熒光定量檢測試劑盒

抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)Danthron；1,8-二羥基蒽醌 精氨酸（arginine））含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)Danthron；1,8-二羥基蒽醌 精氨酸（arginine）含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒
HCA-piC細胞血管緊張素I(ANG I)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SEC11A ELISA Kit轉錄調節因子HOXD9抗體

富含半胱氨酸型酸性蛋白(SPARC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SEC13 ELISA Kit羥基酰谷胱甘肽水解酶樣蛋白抗體

α1-B-糖蛋白(α1BG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CFP(Properdin) ELISA Kit熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體

髓過(guò)氧化物酶抗體(Anti-MPO)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SECISBP2 ELISA KitHeme結合蛋白2抗體

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SEC63 ELISA Kit肝粘附分子2抗體

腎損傷分子1(KIM-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human RRBP1(Ribosome-binding protein 1) ELISA Kit氨基己糖苷酶D抗體

P27蛋白(P27)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human Secretin receptor ELISA KitHHLA2蛋白抗體
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。