A族鏈球菌（GAS）核酸試劑盒廠(chǎng)家

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
紅景天苷Ribosomal Proin L26 (D8F6) Rabbit mAb酸二芐酯

葒草苷（標準品）EGF Receptor (E746-A750del Specific) (D6B6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-噻吩-2-酸

XAV-939;NVP-XAV 939Rpb1 CTD Antibody Sampler Kit2,二磺酰

胡黃連苷I（標準品）C17orf59 (D2B5X) Rabbit mAb依澤替米貝

胡黃連苷 II(標準品)PI3 Kinase p110γ (D55D5) Rabbit mAb對基甲酰

胡黃連苷 III（標準品）PI3 Kinase p110γ (D55D5) Rabbit mAb1,丁磺酸內酯

胡蘿卜苷(標準品)p300 (D2X6N) Rabbit mAb3,4,5-三氟

β-胡蘿卜素（標準品）ZO-1 Antibody甲基酸酯

胡麻屬苷（標準品）PhosphoPlus® RIP3 (Ser227) Antibody Duet四正丁基銨 二氟代三基硅酸鹽

葫蘆巴鹽酸鹽（標準品）Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Biotinylad)2-酸

葫蘆素B(標準品)Acetyl-Histone H2B (Lys12) Antibody(溴基)酸

槲皮苷(標準品）PFKP Antibody2,7-二溴芴

槲皮素-7-O-葡萄糖苷(標準品)ALDH1A1 (D9Q8E) XP®Rabbit mAb(基)酸

花椒毒酚（標準品）Mouse Basic Fibroblast Growth Factor (mFGF basic/FGF2)硝酸釹六水合物

槐果（標準品）Mouse Basic Fibroblast Growth Factor (mFGF basic/FGF2)氨基-溴吡唑

環(huán)氧澤瀉(標準品)Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control2,4,5-三氟甲

黃柏（標準品）FastScan™ Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) ELISA Kit2-氟-6-嘌呤

黃柏酮（標準品）DDB-2 (D4C4) Rabbit mAb二環(huán)己基化膦

酸化雄激素受體CD68/FITC  熒光素標記CD68IgG100 ul

酸化雄激素受體CD69/CLEC2C/AIM/FITC  熒光素標記活化誘導分子CD69IgG100 ul

酸化蛋白激酶AKT1,2,3CD73/FITC  熒光素標記胞漿-5´-核苷酸酶-ⅡIgG100 ul

酸化蛋白激酶BCD79A/IGBP-1 /FITC  熒光素標記免疫球蛋白結合蛋白-1IgG100 ul

酸化活化復制因子2B7-1/CD80 /FITC  熒光素標記抗刺激分子B7-1蛋白IgG100 ul

凋亡相關(guān)蛋白3CD80/B7-1/FITC  熒光素標記刺激分子B7-1蛋白IgG100 ul

自噬相關(guān)蛋白18CD82/KAI1/FITC  熒光素標記腫瘤轉移抑制蛋白1IgG20 ul

自噬相關(guān)蛋白4ACD83/Cell surface proin HB15/FITC  熒光素標記CD83IgG100 ul

載脂蛋白A4CD84/SLAMF5/FITC  熒光素標記CD84IgG100 ul
A族鏈球菌(GAS)核酸試劑盒廠(chǎng)家活性依賴(lài)的神經(jīng)保護肽抗體2,4,6,6-Tetramethyl-3(6H)-pyridine中文名：別名：分子式：C9H13

α1酸性糖蛋白1/類(lèi)粘蛋白1抗體Crebanine中文名：克班寧別名：8,9-Dimethoxy-1,2-methylenedioxyaporphine分子式：C20H214

α1酸性糖蛋白2抗體（類(lèi)粘蛋白2）Glycozolinine中文名：別名：6-Methyl-9H-carbazol-3-ol; Glycozolil分子式：C13H11

核突觸蛋白抗體Siacutine中文名：青風(fēng)藤堿別名：分子式：C19H214

β-肌動(dòng)蛋白/β-Actin 抗體（內參抗體）Pterolactam中文名：別名：5-Methoxy-2-pyrrolidine分子式：C5H92