PCDH1原鈣黏素1ELISA試劑盒

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 巴美靈二乙二丁醋酯 98%燒石棉 CP，20-30目

心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 白曼陀羅素N,N-二乙酰 P,98.0% 氫鈉 AR（劇品）

肌球蛋白重鏈(MHC)試劑盒 白桑八N,N-二乙 99.0%亞硝鈷鈉 99.995% metals basis

肌球蛋白重鏈(MHC)試劑盒 半齒澤蘭素色烯N,N-二乙 CP,98.0%  燒石棉 CP, 10-20目

熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒半翅鹽膚木內酯N,N-二乙 重蒸餾, ≥99.5%鄰聯(lián)苯 AR，98%

熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒北升麻寧雙烯酰 99%鄰聯(lián)苯 CP，97%

血管抑素/血管穩定蛋白(ANG)試劑盒 苯酰硫二乙酯 CP鄰聯(lián)苯 分析標準品,用于環(huán)境分析，≥99%（GC)

血管抑素/血管穩定蛋白(ANG)試劑盒 吡喃葡糖硫二乙酯 GR鹽鄰聯(lián)苯 AR

心型脂肪結合蛋白(h-FABP)試劑盒 鞭打繡球甙 A3-二 99%式碳鋅 AR,57.5%

心型脂肪結合蛋白(h-FABP)試劑盒 鞭打繡球 B二異丁 異構體混合物，97%甘氨 AR,99.5-100.5%

血管舒緩激肽(BK)試劑盒 表斷馬錢(qián)子甙半縮內酯二異丁 99%甘氨鈉 98%

血管舒緩激肽(BK)試劑盒 表千金藤默星異辛 AR甘氨酯鹽鹽 99%

肌球蛋白輕鏈(MLC)試劑盒波爾定異辛 CP,98.0%甘氨乙酯鹽鹽 99%

肌球蛋白輕鏈(MLC)試劑盒補骨脂A乙酰乙乙酯 AR,98%氟鋁 98.5%

α-輔肌動(dòng)蛋白3(ACTN-3)試劑盒布拉易林乙酰乙乙酯 CP,97%氟硅 AR,99.0%

α-輔肌動(dòng)蛋白3(ACTN-3)試劑盒布盧門(mén) B乙酰乙乙酯  >99.0%(GC)氟硅 99.999% metals basis
PCDH1原鈣黏素1ELISA試劑盒溴化乙啶（Ethidium Bromide EB）是一種DNA 結合性熒光色素，其激發(fā)波長(cháng)510nm。發(fā)射波長(cháng)595nm。產(chǎn)生桔紅色熒光。

EB 不具有膜通透性，不能透過(guò)活細胞膜，只能染死細胞，因此用EB 單染時(shí)，正常細胞不著(zhù)色，早期凋亡細胞呈微弱桔紅光，晚期凋亡細胞桔紅色熒光增強。死細胞呈強桔紅光。EB 常與橙合用雙染進(jìn)行凋亡檢測，與橙雙染時(shí)，正常細胞中EB 不能透膜著(zhù)色，而橙可透過(guò)細胞膜，使細胞呈綠色均勻熒光，細胞圓形均勻；而在凋亡細胞中，細胞皺縮、染色質(zhì)凝聚、固縮或斷裂，出芽，凋亡小體形成。染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色顆粒；而壞死細胞被EB 染成桔紅色，由此熒光顏色和細胞形態(tài)可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。

儲存：2-8℃，避光，有效期12個(gè)月。