DEFA3中性粒細胞防御素3ELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)試劑盒細葉遠志皂無(wú)水碳鈉 AR4-(5-乙-1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)試劑盒夏佛塔丁二鈉 AR，99.0%硫代乙乙酯 98%

糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)試劑盒仙鶴草酚B亞硝鐵化鈉 99.98% metals basis3-氟-4-酚 99%

糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)試劑盒仙鶴草酚D亞磷三苯酯 CP,97%對氟苯乙酯 99%

高敏三狀腺原氨(u-T3)試劑盒仙茅亞磷三苯酯 98%3-氟芐 97%

高敏三狀腺原氨(u-T3)試劑盒纖精四氫糠 AR,98.0%8-氟-4-羥-2-三氟喹啉 97%

黃體生成素釋放激素(LHRH)試劑盒纖細四氫糠 CP對氟苯酯 97%

黃體生成素釋放激素(LHRH)試劑盒薟精四氫糠 99%6-羥-2-吡啶羧 97%

8異前列腺素(8-iso-PG)試劑盒腺四 ARN-(2-羥乙)哌 98%

8異前列腺素(8-iso-PG)試劑盒腺嘌呤苯二異酯 98%（劇品）2-羥苯 97%

素(Renin)試劑盒 相思豆素苯二異酯 Standard for GC（劇品）2-羥 99%

素(Renin)試劑盒 相思子苯硫酚 99%（劇品）2- 95%

上腺素(EPI)試劑盒香草四 離子對色譜級，≥99.0% (AT)(R)-(-)-5-羥-2-吡咯烷 99%

上腺素(EPI)試劑盒香草四 ACS, ≥98.0%(S)-(+)-5-羥-2-吡咯烷 98%

雌二受體(ER)試劑盒香草乙乙烷 99%,含銅屑穩定劑(S)-1-Boc-3-羥吡咯烷 98%

雌二受體(ER)試劑盒三 AR,99.5%2-羥-4-三氟嘧啶 97%
DEFA3中性粒細胞防御素3ELISA試劑盒本試劑盒是一種基于衰老時(shí)SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調而對衰老細胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀(guān)測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。

試劑盒組份：

β-半乳糖酶染色固定液—————100ml

X-Gal溶液————————————5ml

β-半乳糖酶染色液A——————1ml

β-半乳糖酶染色液B——————1ml

β-半乳糖酶染色液C——————100ml

絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老(senescence)狀態(tài)。此時(shí)細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發(fā)生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂，并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導的細胞休眠，也不同于細胞生長(cháng)接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大，表達pH 6.0時(shí)有高酶活性的β-半乳糖酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

本細胞衰老β-半乳糖酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖酶催化下會(huì )生成深藍色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀(guān)察到變成藍色的表達β-半乳糖酶的細胞或組織。