ANA中性粒細胞抗體ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(cháng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

生長(cháng)激素結合蛋白(P)試劑盒 吳茱萸內酯亞硝 CP,95%5-吲哚 99%

生長(cháng)激素結合蛋白(P)試劑盒 吳茱萸新四草，二水 PT2-異煙 97%

上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 吳茱萸總偏磷 AR肉桂酰 97%

上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五-O-乙酰-β-D-吡喃葡萄糖鍺試劑 AR3-肉桂 98%

免疫反應性生長(cháng)激素(irGH)試劑盒五水合硫司巴丁鍺試劑 97%2-芐 99%

免疫反應性生長(cháng)激素(irGH)試劑盒五味子素高 99.99% metals basis2--5- 99%

硫褪黑色素(MS)試劑盒五味子N-苯鄰氨苯（釩試劑） AR,95%2--5-苯 97%

硫褪黑色素(MS)試劑盒五味子乙N-苯鄰氨苯（釩試劑） 98%4-吲哚 98%

長(cháng)效狀腺激素(LATS)試劑盒 五味子酚焦銻 AR,99.0%2-苯 98%

長(cháng)效狀腺激素(LATS)試劑盒 五味子酚乙1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0% 2-硫-5-嘧啶-4- 95%

上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五味子素1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 98%2--4-硝吡啶 98%

上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五味子乙素多乙烯多 AR4-吲哚 98%

免疫反應性生長(cháng)激素(irGH)試劑盒五味子酯檸檬二氫 AR,98.0%2--6-氟苯 98%

免疫反應性生長(cháng)激素(irGH)試劑盒五味子酯戊氟氫化 AR，99.0%2--N,N-二乙酰 97%

抗利尿激素/血管加壓素/精氨加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒五味子酯乙氟氫化 CP，98.0%4--2-三氟喹啉 97%

抗利尿激素/血管加壓素/精氨加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒西貝母N-苯硫脲 98%2--4-吡啶 95%
ANA中性粒細胞抗體ELISA試劑盒本染色液是一種組織或細胞染色時(shí)常用的可以把細胞核染成綠色或藍綠色，把細胞漿和細胞核中的核仁染成紅色的染色液。甲基綠可以和細胞核中的DNA結合，從而產(chǎn)生細胞核染色；而派洛寧可以和細胞漿或核仁中的RNA結合，從而可以使細胞漿和核仁被染色。改進(jìn)了染色液配制方法，不含很多甲基綠-派洛寧染色液中使用的劇毒甲醇。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本甲基綠-派洛寧染色液染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行甲基綠-派洛寧復染。一個(gè)包裝的本染色液至少可以染色200個(gè)樣品。

注意事項：

1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，中性樹(shù)膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片，需自備90%乙醇，無(wú)水乙醇以及二甲苯。

2第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預實(shí)驗。

儲存條件：室溫避光，有效期一年。

操作步驟：

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。